[发明专利]脾氨肽口服冻干粉活力快速测定方法在审
| 申请号： | 201910756975.X | 申请日： | 2019-08-16 |
| 公开（公告）号： | CN110616247A | 公开（公告）日： | 2019-12-27 |
| 发明（设计）人： | 秦伟;刘琦;韩树璘;衣学龙 | 申请（专利权）人： | 大连百利天华制药有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/02 | 分类号： | C12Q1/02;G01N21/31 |
| 代理公司： | 21119 大连科技专利代理有限责任公司 | 代理人： | 佟蕊 |
| 地址： | 116000 辽宁*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种脾氨肽口服冻干粉活力快速测定方法，脾氨肽口服冻干粉与健康小鼠脾淋巴细胞共孵时，可将其免疫活性过继给鼠脾淋巴细胞，使之成为致敏淋巴细胞。该致敏淋巴细胞释放出白细胞粘附抑制因子，使白细胞粘附抑制指数增高。因此，可通过测定白细胞粘附抑制指数来检定成品的活力。本法引入MTT（噻唑蓝），是因为MTT可被活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶还原成蓝紫色化合物（Formazan），此还原产物的多少与细胞数在一定范围内成正比，用二甲基亚砜将沉积在细胞中的Fromazan溶解，用酶联检测仪测定490nm波长的A值，将数值代入公式，即可求出粘附抑制指数。该方法简单，检测数据更准确。 | ||
| 搜索关键词： | 白细胞粘附 淋巴细胞 冻干粉 脾氨肽 致敏 鼠脾淋巴细胞 琥珀酸脱氢酶 二甲基亚砜 脾淋巴细胞 还原产物 检测数据 健康小鼠 快速测定 免疫活性 抑制因子 成正比 活细胞 检测仪 蓝紫色 细胞数 线粒体 噻唑蓝 波长 检定 酶联 粘附 沉积 还原 增高 溶解 细胞 释放 引入 | ||
【主权项】：
1.脾氨肽口服冻干粉活力快速测定方法，其特征在于，/n（1）取小鼠3-5只，雌雄均可，雌鼠无孕，体表消毒后放净化工作台内，无菌操作取出脾脏，在灭菌平皿内置于灭菌尼龙网袋中，加适量RPMI-1640液，用灭菌针芯研磨后吸集于灭菌小试管中，将脾细胞悬液缓缓重层于淋巴细胞分离液上面，在水平离心机上于20秒内使离心力达2000r/min，离心20min，吸取淋巴细胞层，用适量1640培养液悬浮，1500r/min，离心5min，如此洗2次，计数淋巴细胞，并用1640培养液调整浓度为3×106/ml-5×106/ml备用；/n（2）样品2mg/ml ：脾氨肽口服冻干粉1支，加1640培养液制成含多肽2mg/ml 溶液；/n（3）取灭菌的96孔细胞培养板，每份样品设至少三个实验孔和三个对照孔，按下表操作：/n
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