[发明专利]一种从浓香型白酒酒醅中提取总RNA的方法

摘要

本发明公开了一种从浓香型白酒酒醅中提取总RNA的方法，包括以下步骤：脱腐处理、PBS处理、提取、去除蛋白质、沉淀RNA、清洗RNA和溶解RNA。本发明提取之前进行脱腐处理和PBS处理，减少了大量杂质干扰，进一步通过SDS提取液中酸性水饱和酚的提取效果与SDS的裂解效果相结合有效提取RNA，且β‑巯基乙醇、酸性水饱和酚可共同抑制RNA酶的活性，再借助酸性水饱和酚、氯仿‑异戊醇混合液，使蛋白质变性、沉淀，从而去除蛋白质，最后所得总RNA浓度高、纯度高、完整性好，可用于后续分子生物学实验。

主权项

1.一种从浓香型白酒酒醅中提取总RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)脱腐处理：取7g酒醅于离心管中，加入3‑8mL 0.8‑1.2mol/L的CaCl₂溶液和3‑8mL 4‑6％PVP溶液，涡旋混匀，离心，弃上清；沉淀中加入5‑15mL 0.04‑0.06mol/L的草酸钠溶液，涡旋混匀，离心，弃上清；(2)PBS处理：步骤(1)处理得到的沉淀中加入10‑15mL 0.08‑0.12mol/L PBS缓冲液悬浮，加入3‑6颗大玻璃珠，涡旋振荡，离心，取上清至新的离心管中，剩余沉淀再洗涤一次，将两次的上清混合，离心，弃去上清，收集细胞沉淀，然后转移至新的离心管中；(3)提取：步骤(2)处理得到的细胞沉淀中加入0.4‑0.6g小玻璃珠，再加入260‑330uL SDS提取液，涡旋振荡，然后离心，取上清至新的离心管中；继续在沉淀中加入260‑330uL SDS提取液，涡旋振荡，然后离心，取上清和前一步中的上清混合；(4)去除蛋白质：向步骤(3)得到的上清中加入490‑510uL酸性水饱和酚，涡旋混匀，离心，取上清；上清中加入490‑510uL氯仿‑异戊醇混合液，涡旋混匀，离心，取上清；(5)沉淀RNA：步骤(4)得到的上清中加入1.8‑2.2倍体积的PEG‑NaCl混合液，混匀，低温静置1.5‑2.5h，离心，弃上清；(6)清洗RNA：步骤(5)得到的沉淀中加入180‑220uL的65‑75％乙醇清洗沉淀，离心，弃上清，吹干沉淀；(7)溶解RNA：在步骤(6)沉淀中加入50uL RNase‑free water溶解RNA，低温保存。