[发明专利]基于T5外切酶的双轮信号扩增目视检测层出镰刀菌的方法有效
| 申请号： | 201910769752.7 | 申请日： | 2019-08-20 |
| 公开（公告）号： | CN110551797B | 公开（公告）日： | 2022-09-13 |
| 发明（设计）人： | 王莹 | 申请（专利权）人： | 临沂大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844;C12Q1/6895;C12R1/77 |
| 代理公司： | 北京栈桥知识产权代理事务所(普通合伙) 11670 | 代理人： | 潘卫锋 |
| 地址： | 276000 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种基于T5外切酶的双轮信号扩增目视检测层出镰刀菌的方法，属于生物检测技术领域，所述方法包括：基因组DNA的提取、RPA反应、连接反应、外切反应、RCA反应及氧化还原反应。本发明基于T5外切酶和T4DNA连接酶建立了一种新的目视检测F.proliferatum的方法，通过将RPA产物一条链的两端连接成环从而将RPA和RCA偶联起来，目标序列经两轮扩增，检测限达到0.05pg，具有高灵敏度，本发明的方法具有无需标记，操作简单，不需要复杂的仪器，适用性高的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 t5 外切 双轮 信号 扩增 目视 检测 层出 镰刀 方法 | ||
【主权项】：
1.一种基于T5外切酶的双轮信号扩增目视检测层出镰刀菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)基因组DNA的提取：取玉米粉作为待测样本，以5倍体积的缓冲液悬浮，得到悬浮液，采用煮沸冷却法将悬浮液内的基因组DNA从细胞壁中释放出来，得到粗提液；/n(2)RPA反应：取1μL粗提液作为RPA反应的模板以及2.5μL Mg(Ac
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