[发明专利]基于酶切PCR的特定基因片段富集检测试剂盒和方法在审
| 申请号： | 201910770408.X | 申请日： | 2019-08-20 |
| 公开（公告）号： | CN110438211A | 公开（公告）日： | 2019-11-12 |
| 发明（设计）人： | 黄种山;其他发明人请求不公开姓名 | 申请（专利权）人： | 福建晨欣科生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858;C12N9/22;C12N15/55 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 350005 福建省福州市晋安*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明在常规PCR的基础上引入从堆肥样本中分离得到的耐高温限制酶DFh2，构建了用于特定突变基因片段富集检测的酶切PCR试剂盒和方法。酶切PCR试剂盒中含有酶DFh2及其缓冲液，其中酶DFh2的氨基酸序列如SEQ NO：2所示，缓冲液选用美国NEB公司的CutSmart Buffer。使用酶切PCR扩增时，需要在常规PCR体系的基础上再按每25μl扩增体系中加入1.5μg的酶DFh2和0.25μl的10×CutSmart Buffer进行。所构建的酶切PCR试剂盒和方法可以特异性扩增富集含量低至1%的目标突变基因片段，同时野生型基因片段将无法扩增，从而实现简便高效地富集检测样品中的特定突变基因片段，特别适用于低丰度突变基因片段的富集检测。 | ||
| 搜索关键词： | 酶切 富集检测 突变基因 常规PCR 缓冲液 构建 氨基酸序列 特异性扩增 野生型基因 堆肥 基因片段 扩增体系 低丰度 耐高温 试剂盒 限制酶 富集 扩增 样本 引入 | ||
【主权项】：
1.一种用于特定基因片段富集检测的酶切PCR试剂盒，其特征在于所述酶切PCR试剂盒主要组份包括（1）耐高温Ⅱ型限制性内切酶DFh2及其缓冲液，其中酶DFh2的氨基酸序列如SEQ NO：2所示，缓冲液选用美国NEB公司的CutSmart Buffer；（2）常规PCR通用组份，主要包括配套的耐热DNA聚合酶、PCR缓冲液和底物dNTPs；（3）设计用于特异性扩增目标基因片段的常规PCR引物。
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