[发明专利]一种硝化细菌的PCR鉴定方法在审
| 申请号： | 201910781333.5 | 申请日： | 2019-08-22 |
| 公开（公告）号： | CN110423830A | 公开（公告）日： | 2019-11-08 |
| 发明（设计）人： | 车树刚;马娜娜;马韵升;吴文雷;杨传伦;傅英旬;孔凡衡;魏征;韩立霞;吴书超 | 申请（专利权）人： | 黄河三角洲京博化工研究院有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 济南舜源专利事务所有限公司 37205 | 代理人： | 赵斌;苗峻 |
| 地址： | 256500 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明属于生物工程技术领域，提供了一种硝化细菌的PCR鉴定方法，以硝化细菌的专属特征性基因—亚硝酸还原酶基因(NiR)为模板设计合成一对特异性引物，并以硝化细菌基因组DNA为模板进行PCR扩增，通过对PCR扩增条件优化，然后对PCR扩增产物进行琼脂糖水平电泳，根据电泳泳道中条带的有无及大小，判断该细菌菌株是否属于硝化细菌或者混合菌群中是否含有硝化细菌。本方法是以用亚硝酸还原酶基因为模板设计的特异引物为PCR扩增引物，实验结果特异性强，实验操作简单，结果可靠性高，并通过优化PCR扩增条件缩短了硝化细菌的鉴定周期，较常规PCR扩增时间缩短了45％，为硝化细菌种群的鉴定提供了一个方便、有效的鉴定方法。 | ||
| 搜索关键词： | 硝化细菌 模板设计 生物工程技术领域 亚硝酸还原酶基因 亚硝酸还原酶 结果可靠性 特异性引物 基因组DNA 电泳泳道 混合菌群 鉴定周期 时间缩短 实验操作 水平电泳 特异性强 特异引物 条件优化 细菌菌株 常规PCR 琼脂糖 特征性 扩增 条带 种群 合成 基因 优化 | ||
【主权项】：
1.一种硝化细菌的PCR鉴定方法，其特征在于：具体步骤如下：⑴引物的设计与合成：以硝化细菌的专属特征性基因‑亚硝酸还原酶基因为模板，设计并合成一对特异性引物，引物具体序列如下：上游引物(F)：5'‑GGTGAATTCATGGACATCCGAGCTCAAGTT‑3'，其核苷酸序列如Seq ID No:1所示；下游引物(R)：5'‑GCAAAGCTTTTACTAGAAGCCTATGGTCCTCT‑3'，其核苷酸序列如Seq ID No:2示；⑵菌种基因组DNA的提取：采用天根细菌基因组DNA提取试剂盒提取待测菌种的基因组DNA；⑶PCR扩增体系：分别以步骤(1)中合成的特异引物为PCR扩增引物，以步骤(2)中提取的基因组DNA为PCR扩增模板，进行PCR扩增，25ul PCR扩增体系如下：
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⑸琼脂糖水平电泳：观察是否含有大小为1542bp目标条带，其核苷酸序列如Seq ID No:3所示；若有则判定为试样中含有硝化细菌。
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