[发明专利]一种问号钩端螺旋体MAP疫苗的制备方法在审
| 申请号： | 201910785931.X | 申请日： | 2019-08-23 |
| 公开（公告）号： | CN110478478A | 公开（公告）日： | 2019-11-22 |
| 发明（设计）人： | 孙爱华;严杰;张金良;楼宏强 | 申请（专利权）人： | 杭州医学院 |
| 主分类号： | A61K39/02 | 分类号： | A61K39/02;A61P31/04;C07K19/00;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 33213 杭州浙科专利事务所(普通合伙) | 代理人： | 刘元慧<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 310053 浙江省杭*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了通过构建问号钩端螺旋体LipL21、LipL32、groEL和loa22蛋白的优势T‑和B‑细胞T‑B联合多价抗原表位融合基因及其原核表达系统，表达由抗原表位组成的多抗原肽（multiple antigenic peptide，MAP）与高分子核心载体人工交联制备MAP疫苗。本发明制备的MAP疫苗免疫效果好、成本较低，能有效诱导细胞免疫，减少了疫苗毒副作用，提高了安全性，增强了免疫针对性。 | ||
| 搜索关键词： | 制备 有效诱导细胞 原核表达系统 螺旋体 高分子核心 毒副作用 多价抗原 多抗原肽 抗原表位 免疫效果 融合基因 问号钩 表位 构建 蛋白 疫苗 细胞 联合 | ||
【主权项】：
1.一种问号钩端螺旋体MAP疫苗的制备方法，其特征在于包括以下步骤：/n1）选择钩体4种蛋白的6个表位设计T-B联合多价抗原表位融合基因，经合成后插入pET-28a表达载体构建以E. coli BL21表达宿主菌的工程菌，IPTG诱导表达，纯化处理，得到多价抗原表位rLLGL蛋白；/n2）采用中空纤维超滤器收集Ni-NTA亲和层析法提纯后的T-B联合多价抗原表位rLLGL蛋白，碳二亚胺活泼酯法封闭T-B联合多价抗原表位氨基，然后通过其羧基与Poly-Asp-Lys交联，采用中空纤维超滤器收集T-B表位-Poly-Asp-Lys交联物；/n3）将步骤2）收集的T-B表位-Poly-Asp-Lys交联物与氢氧化铝佐剂混合后形成多抗原肽MAP疫苗。/n
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