[发明专利]一种应用斜生栅藻测试磺胺类抗生素生物毒性的方法

摘要

本发明公开了一种应用斜生栅藻测试磺胺类抗生素生物毒性的方法。以磺胺类抗生素为研究对象，以斜生栅藻为测试生物，以96孔微孔板为载体，通过96孔微孔板加样分析方法，加样96h后采用多功能酶标仪测试681nm处斜生栅藻的吸光值，利用实验组与对照组的吸光值来计算斜生栅藻的生长抑制率，利用基于Matlab自编的Logit函数拟合计算出的EC₅₀值的负对数pEC₅₀，以pEC₅₀值为毒性指标判断磺胺类抗生素的毒性大小。本发明方法操作简单，方便快捷，重现性好，能够广泛适用于测试磺胺类抗生素的毒性。

主权项

1.一种应用斜生栅藻测试磺胺类抗生素生物毒性的方法，其特征在于具体步骤为：（1）将磺胺类抗生素标准品按照溶解度配成标准溶液，将标准溶液置于4℃冰箱保存待用；（2）培养斜生栅藻使其达到对数生长期，用血球计数板在显微镜下计数，当藻密度为5×10⁵个/mL时，将其作为工作藻液；（3）将步骤（1）配制的标准溶液加入到白色透明96孔微孔板中，设置好微孔板中磺胺类抗生素浓度梯度，然后向白色透明96孔微孔板中加入步骤（2）得到的工作藻液，制作磺胺类抗生素和工作藻液的反应体系，为防止产生边缘效应，周边孔每孔加入300μL超纯水，实验组每孔含100μL工作藻液和100μL不同浓度的磺胺类抗生素，空白对照组每孔含100μL工作藻液和100μL超纯水，每孔总体积为200μL；相同条件下，每个磺胺类抗生素浓度进行9次重复实验，并取平均值；采用多功能酶标仪测试在681nm下斜生栅藻的0h吸光值RLU；然后将96孔微孔板置于光照3000lux、温度22℃的光照培养箱中培养96h，再采用多功能酶标仪测试在681nm下斜生栅藻的吸光值RLU；（4）利用实验组与空白对照组的吸光值来计算斜生栅藻的生长抑制率，以磺胺类抗生素的不同浓度为横坐标，以不同浓度对应的生长抑制率为纵坐标，利用基于Matlab自编的Logistic函数对不同浓度磺胺类抗生素与生长抑制率E进行非线性拟合：；式中：I₀为空白对照组的RLU平均值，I为实验组各浓度9次平行样的RLU平均值；最后，利用基于Matlab自编的Logit函数拟合计算出的EC₅₀值的负对数pEC₅₀，以pEC₅₀作为毒性指标，判断磺胺类抗生素的毒性大小，pEC₅₀的数值越大，毒性越大。