[发明专利]一种高效利用发根农杆菌诱导朱砂根产生毛状根的方法

摘要

本发明提供了一种高效利用发根农杆菌诱导朱砂根产生毛状根的方法，属于植物组织培养技术领域。本发明所述方法包括如下步骤：(1)发根农杆菌的活化：(2)朱砂根组培无菌叶片毛状根诱导；(3)毛状根继代培养。本发明提供的方法具备操作简单、省时高效，朱砂根毛状根的诱导率高，能够获得朱砂根皂苷含量高的朱砂根毛状根，并能显著缩短其培养时间，为工业生产提供技术支持和科学依据，同时利于保护生态环境。

主权项

1.一种高效利用发根农杆菌诱导朱砂根产生毛状根的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：/n(1)发根农杆菌的活化：/nA、将-80℃保存的发根农杆菌菌株在YMB固体培养基(含Amp 50mg·L^-1)上划线，于28℃恒温黑暗培养至长出单菌斑，挑单菌斑于YMB液体培养基(含Amp 50mg·L^-1)中，置于恒温振荡器中以180rpm、28℃恒温黑暗培养至液体浑浊；/nB、重复进行2次上述A活化步骤中的划线、挑单菌斑、液体培养操作，共活化3次；在第3次活化进行液体培养时，于YMB液体培养基(含Amp 50mg·L^-1)中加入AS 100μmol·L^–1，测定菌液OD₆₀₀值至0.5～0.8时，即制备发根农杆菌感受态细胞，用于浸染介导转化；/n2)朱砂根组培无菌叶片毛状根诱导：/n包括预培养、共培养和除菌培养，将预培养后的朱砂根外植体叶片上表皮朝上水平接种在1/2MS固体培养基(含AS 100μmol·L^–1)上，于28℃恒温黑暗条件下共培养至叶片外植体周围略有菌斑，随后转接在除菌培养基(1/2MS+Cef)上除菌培养，反复继代抑制发根农杆菌增长至无菌，于25±1℃黑暗培养；/n3)毛状根继代培养：当毛状根长至1～2cm时，切取毛状根转移至新的1/2MS培养基中继代培养。/n