[发明专利]一种石蜡包埋样本中蛋白质的提取及检测分析方法有效
申请号: | 201910804757.9 | 申请日: | 2019-08-28 |
公开(公告)号: | CN110501437B | 公开(公告)日: | 2021-03-23 |
发明(设计)人: | 陈亚运;华权高;李立;赵海义;鲁思琴;李如萍;舒芹;张雪娇 | 申请(专利权)人: | 武汉金开瑞生物工程有限公司 |
主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02;G01N30/06 |
代理公司: | 武汉蓝宝石专利代理事务所(特殊普通合伙) 42242 | 代理人: | 严超 |
地址: | 430000 湖北省武汉市东湖开发区高新大道*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | 本发明具体涉及一种石蜡包埋样本中蛋白质的提取及检测分析方法。本发明采用丙酮沉淀法,充分裂解后的蛋白溶液加入冷丙酮和30mM DTT,涡旋混匀,‑20℃沉淀,离心时去掉上清后采用质谱更兼容的溶液重悬蛋白,SDS等表面活性剂能够和蛋白结合,丙酮沉淀蛋白时会一起沉淀下来,所以丙酮沉淀一次只能去掉部分的SDS,待重悬的蛋白进行还原烷基化后,再次加入冷丙酮和10mM DTT,‑20℃沉淀,离心去掉上清后再次采用质谱更兼容的溶液重悬蛋白,经过两次丙酮沉淀与裂解液重悬置换,SDS对后续实验的影响基本消除,并且每个样品只需3ml左右的丙酮,成本大约0.1元,相较于超滤管,节省了更多成本。 | ||
搜索关键词: | 一种 石蜡 包埋 样本 蛋白质 提取 检测 分析 方法 | ||
【主权项】:
1.一种石蜡包埋样本中蛋白质的提取方法,其特征在于,包括以下步骤:去石蜡、冷冻干燥、裂解、加热、离心、丙酮沉淀、离心复溶、还原、烷基化、二次丙酮沉淀、离心。/n
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