[发明专利]xCas9n-epBE碱基编辑系统在基因编辑中的应用

摘要

本发明公开了xCas9n‑epBE碱基编辑系统在基因编辑中的应用。本发明公开的xCas9n‑epBE碱基编辑系统包括xCas9n、PmCDA1、UGI和tRNA‑esgRNA；所述tRNA‑esgRNA靶向靶点序列；所述tRNA‑esgRNA如式I所示：tRNA‑所述靶点序列转录的RNA‑esgRNA骨架(式I)。通过实验证明：本发明的xCas9n‑epBE碱基编辑系统在植物基因组中实现了靶点序列的编辑，尤其是在PAM序列为NGT、NGA、NGG、GAA或GAT时实现了靶点序列中由碱基C到碱基T的替换。本发明的xCas9n‑epBE碱基编辑系统在植物或动物基因编辑中具有广泛的应用前景。

主权项

1.基因组靶点序列的编辑方法，为方法(一)或方法(二)或方法(三)或方法(四)：/n所述方法(一)包括如下步骤：将xCas9n的编码基因、转录tRNA-esgRNA的DNA分子、PmCDA1的编码基因和UGI的编码基因导入生物体或生物细胞内，使所述xCas9n、所述tRNA-esgRNA、所述PmCDA1和所述UGI的编码基因均得到表达，实现基因组靶点序列的编辑；/n所述方法(二)包括如下步骤：将xCas9n的编码基因、转录tRNA-esgRNA的DNA分子和PmCDA1的编码基因导入生物体或生物细胞内，使所述xCas9n、所述tRNA-esgRNA和所述PmCDA1的编码基因均得到表达，实现基因组靶点序列的编辑；/n所述方法(三)包括如下步骤：将xCas9n、tRNA-esgRNA、PmCDA1和UGI导入生物体或生物细胞内，实现基因组靶点序列的编辑；/n所述方法(四)包括如下步骤：将xCas9n、tRNA-esgRNA和PmCDA1导入生物体或生物细胞内，实现基因组靶点序列的编辑；/n所述tRNA-esgRNA靶向所述靶点序列；/n所述tRNA-esgRNA如式I所示：tRNA-所述靶点序列转录的RNA-esgRNA骨架(式I)；/n所述tRNA为m1)或m2)或m3)：/nm1)将序列1第474-550位中的T替换为U得到的RNA分子；/nm2)将m1)所示的RNA分子经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的RNA分子；/nm3)与m1)或m2)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性且具有相同功能的RNA分子；/n所述esgRNA骨架为n1)或n2)或n3)：/nn1)将序列1第571-656位中的T替换为U得到的RNA分子；/nn2)将n1)所示的RNA分子经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的RNA分子。/nn3)与n1)或n2)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性且具有相同功能的RNA分子；/n所述靶点序列的PAM序列为如下任一种：NGT、NGA、NGG、GAA、GAT；N为A、T、C或G。/n