[发明专利]一种区分鹿自然感染牛分枝杆菌和免疫卡介苗的检测方法及其基因检测特异性引物在审
申请号: | 201910814514.3 | 申请日: | 2019-08-30 |
公开(公告)号: | CN110541042A | 公开(公告)日: | 2019-12-06 |
发明(设计)人: | 李海涛;苗利光;刘艳环;李滋睿;张雪梅 | 申请(专利权)人: | 中国农业科学院特产研究所 |
主分类号: | C12Q1/689 | 分类号: | C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/32 |
代理公司: | 23211 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 | 代理人: | 田鸿儒<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
地址: | 130112 吉林省长*** | 国省代码: | 吉林;22 |
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摘要: | 本发明公开了一种区分鹿自然感染牛分枝杆菌和免疫卡介苗的检测方法及其基因检测特异性引物,属于生物技术领域,具体为:生物样本的前处理后,提取生物基因组DNA;使用提取的生物基因组DNA作为PCR扩增的DNA模板,引物为牛分支杆菌基因检测特异性引物,进行PCR扩增;产物进行琼脂糖凝胶检测;根据结果进行判断。上述方法可以快速简便地检测生物样本中自然感染的牛分支杆菌,双重PCR检测方法可靠,准确性高,并且也能将自然感染和免疫卡介苗的生物样本区分开。 | ||
搜索关键词: | 生物样本 牛分支杆菌 生物基因组 特异性引物 基因检测 卡介苗 检测 琼脂糖凝胶检测 生物技术领域 感染和免疫 牛分枝杆菌 双重PCR 前处理 感染 引物 | ||
【主权项】:
1.一种区分鹿自然感染牛分枝杆菌和免疫卡介苗的检测方法及其基因检测特异性引物,其特征在于:包括如下步骤:/n(1)生物样本的前处理:生物样本中加入含有20mmol/LTris-HCl、1%Triton X-100作为处理液,混匀后离心,弃去上清,加入TE缓冲液,重悬沉淀,得到样本液;/n(2)双重PCR检测:提取步骤1所得样本液中的生物基因组DNA;使用提取的生物基因组DNA作为PCR扩增的DNA模板,引物为牛分支杆菌基因检测特异性引物,进行PCR扩增;产物进行琼脂糖凝胶检测;/n(3)结果判定:琼脂糖凝胶检测结果中如果出现了285bp和969bp两条带,结果判定为生物样本中含有生物个体自然感染的牛分支杆菌;如果只出现969bp一条带,结果判定为免疫卡介苗;或未检测到任何一条带,结果判定为生物样本中不含有生物个体自然感染的牛分支杆菌并且未免疫卡介苗。/n
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