[发明专利]利用CRISPR/Cas9技术构建斑马鱼asap1a基因敲除突变体的方法在审
| 申请号： | 201910815452.8 | 申请日： | 2019-08-30 |
| 公开（公告）号： | CN110511934A | 公开（公告）日： | 2019-11-29 |
| 发明（设计）人： | 崔佳;吴长新;赵仲华 | 申请（专利权）人： | 山西大学;长治医学院 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/90;C12Q1/6869;A01K67/027 |
| 代理公司： | 14115 太原申立德知识产权代理事务所(特殊普通合伙) | 代理人： | 程园园<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 030006*** | 国省代码： | 山西;14 |
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| 摘要： | 本发明公开了利用CRISPR/Cas9技术构建斑马鱼asap1a基因敲除突变体的方法。具体包括以下步骤：确定asap1a基因敲除的靶点位置即asap1a‑gRNA靶位点，体外转录获得asap1a‑gRNA，将asap1a‑gRNA与Cas9mRNA导入斑马鱼受精卵中，筛选培养获得稳定遗传的asap1a基因敲除突变体。本发明根据选择的asap1a基因的一段独特的高效率打靶区，利用CRISPR/Cas9技术使得斑马鱼中的asap1a基因被敲除并产生可遗传的asap1a基因敲除的斑马鱼，且本发明共获得了3种突变类型的asap1a基因敲除突变体斑马鱼品系，对研究asap1a基因的功能奠定动物模型基础。 | ||
| 搜索关键词： | 基因敲除 斑马鱼 突变体 基因 斑马鱼受精卵 斑马鱼品系 靶点位置 动物模型 技术构建 筛选培养 体外转录 突变类型 稳定遗传 靶位点 打靶区 高效率 敲除 遗传 研究 | ||
【主权项】：
1.利用CRISPR/Cas9技术构建斑马鱼asap1a基因敲除突变体的方法，其特征在于：包括如下步骤：/nS1.在斑马鱼asap1a基因上选择asap1a-gRNA靶位点，分析确认asap1a-gRNA靶位点敲除特异性；/nS2.制备asap1a-gRNA；/nS3.将asap1a-gRNA和Cas9mRNA导入斑马鱼中制备F0代斑马鱼，并鉴定asap1a-gRNA靶位点打靶效率；/nS4.鉴定F0代斑马鱼子代即F1代斑马鱼卵中asap1a基因类型，进而筛选出亲本F0代斑马鱼中可以遗传的asap1a敲除突变体；/nS5.筛选F2代斑马鱼中asap1a基因敲除纯合突变体，培养获得稳定遗传的斑马鱼asap1a基因敲除突变体，即完成利用CRISPR/Cas9技术对斑马鱼asap1a基因敲除突变体的构建。/n
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