[发明专利]一种维生素k2(MK-7型)的发酵方法

摘要

本发明公开了一种维生素k2(MK‑7型)的发酵方法，使用的菌种为纳豆芽孢杆菌，培养基采用浓配方，发酵过程中流加葡萄糖，有效补充菌体生长所需的营养，发酵过程中补加磷酸、氨水，分阶段分阶段严格控制pH，有效保障菌体生长代谢最适PH，通过调节转速、空气流量、罐压分阶段控制溶氧，有效提高氧的利用率减少氧对菌体细胞损伤，流加葡萄糖后，发酵液总糖浓度控制在0.3‑0.7％左右，在这个范围内菌丝的正常生长且代谢稳定，本发明可将维生素k2(MK‑7型)发酵单位提高至80mg/L，既能显著提高发酵单位，又为维生素k2(MK‑7型)的发酵产业化提供一个良好的方法。

主权项

1.一种维生素k2(MK-7型)的发酵方法，使用的菌种为纳豆芽孢杆菌，其特征在于：包括以下步骤：/n(1)将保存在甘油管的菌株接入固体培养基中进行菌种活化，37℃培养箱中培养，20～28h，连续活化两代，固体培养基配方为：葡萄糖3％L，蛋白胨2％，NaCl 0.5％，酵母膏0.5％，琼脂2％，溶剂为水；/n(2)利用灭菌后的生理盐水将斜面上的菌洗下，接入装有种子培养基的种子罐中，种量0.1％(v/v)，通气量0.5～1.0vvm，搅拌转速200～400rpm，罐温35～37℃，培养18～24h，获得种子液，种子培养基配方为葡萄糖1-5％，蛋白胨2-8％，K₂HPO₄ 0.1-0.2％，LKH₂PO₄0.01-0.1％NaCl 0.2-0.4％，MgSO₄·7H₂O 0.01-0.1％，溶剂为水；/n(3)将种子液接入装有发酵培养基的发酵罐中，接种量5～10％(v/v)，发酵过程中温度35～37℃，起始通气量0.5～2.0VVM，罐压0.04～0.07Mpa，培养72-120h，发酵生产维生素K2，发酵培养基配方为葡萄糖4-6.0％，甘油1-4.0％，酵母粉0.5-1.5％，大豆蛋白胨0.5-1.5％，NaCl 0.2-0.35％，KH₂PO₄ 0.05-0.1％，MgSO₄·7H₂O 0.05-0.15％，溶剂为水；/n所述发酵方法采用浓配方高密度发酵，该方法的发酵条件为：/nS1、发酵培养基配方:葡萄糖4-6.0％，甘油1-4.0％，酵母粉0.5-1.5％，大豆蛋白胨0.5-1.5％，NaCl 0.2-0.35％，KH₂PO₄ 0.05-0.1％，MgSO₄·7H₂O 0.05-0.15％，溶剂为水；/nS2、发酵过程中温度35～37℃，起始通气量0.5～0.8VVM，起始罐压0.04～0.06Mpa，起始搅拌转速100～250rpm；/nS3、分阶段溶氧控制：发酵培养基灭菌至121℃保压时，校正溶氧0％，移种后刚开始发酵培养时校正溶氧100％，发酵过程中逐渐调高通气量、转速与罐压使溶氧在0-10h不低于30％，在11-24h控件控制5-15％，在25-60h控制20～40％左右，在61h后控制40～60％之间，转速最高转速最高650rpm，通气量最大约2.0VVM，最小约0.5VVM，罐压最高0.07Mpa、最小0.04Mpa；/nS4、分阶段严格控制pH：发酵0-10h，开始补加氨水，控制pH6.5～6.8，发酵10-24h，补加磷酸或氨水，控制pH7.0～7.2，发酵24-60h，补加磷酸或氨水，控制pH约7.5～7.8，发酵60h后，补加磷酸或氨水，控制pH8.0～8.5；/nS5、发酵24h后，开始流加葡萄糖，使发酵液总糖浓度控制在0.3-0.7％，直到发酵结束；/nS6、发酵培养期72-120h后放罐。/n