[发明专利]一种全转录组范围单碱基分辨率检测RNA N6-甲基腺嘌呤修饰的方法

摘要

本发明提供一种全转录组范围单碱基分辨率检测RNA N6‑甲基腺嘌呤修饰的方法及试剂盒。该方法基于体内核糖核酸(RNA)腺嘌呤的N6‑烯丙基标记并化学处理诱导其在逆转录成DNA过程中发生碱基突变，然后通过核酸测序手段识别突变位点，进而得到a6A位点，该位点即为细胞RNA中原本m6A修饰的位点。本发明方法首次实现了在细胞内进行N6‑烯丙基腺嘌呤的特异性标记，该标记不但能够用于替换细胞内的N6‑甲基腺嘌呤位点，并且能够借助突变测序的手段进行定位。本发明方法与现有应用于m6A检测的基因测序技术相比，由于突变位点可以精确到单碱基的分辨率，提升了目前普遍采用的基于m6A抗体免疫沉淀与大规模平行测序方法检测m6A位点的精度，是一个直接的高通量单碱基鉴定方法。