[发明专利]一种链霉菌的次级代谢产物的分离提取方法有效

专利信息
申请号: 201910829856.2 申请日: 2019-09-04
公开(公告)号: CN110452940B 公开(公告)日: 2021-03-30
发明(设计)人: 薛长艳;李建宋;奚逢源;方佳双 申请(专利权)人: 台州职业技术学院
主分类号: C12P17/12 分类号: C12P17/12;C12P19/44;C12P13/02;C12P17/06;C12P17/18;C07D211/88;C07D405/12;C07C231/24;C07D405/06;C07D487/04;C07D309/30;C07C235/76;A61P31/12;A
代理公司: 重庆市信立达专利代理事务所(普通合伙) 50230 代理人: 陈炳萍
地址: 318000 浙江*** 国省代码: 浙江;33
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摘要: 发明属于代谢产物提取技术领域,公开了一种链霉菌的次级代谢产物的分离提取方法,利用HP‑20树脂柱洗脱发酵液、硅胶柱和Sephadex LH‑20凝胶柱层析分离、(半)制备高效液相分析与纯化化合物;运用现代仪器波谱分析技术如核磁共振、高分辨质谱等对单体化合物进行结构鉴定。本发明将从土样中分离得到的具有抗菌及抗肿瘤细胞活性的放线菌进行发酵,对其产生的代谢产物和部分产物生物活性进行归纳研究,丰富了微生物化合物多样性;为其他放线菌产活性物质的研究与发掘提供了参考与理论基础;同时,也为探索开发活性天然化合物及商业用药提供了前提。
搜索关键词: 一种 霉菌 次级 代谢 产物 分离 提取 方法
【主权项】:
1.一种链霉菌的次级代谢产物的分离提取方法,其特征在于,所述链霉菌的次级代谢产物的分离提取方法包括以下步骤:/n步骤一,按接种量5%V/V,将培养24–48h种子培养基接种到20L摇瓶发酵的发酵培养基;装量为250mL/1L摇瓶,28℃,250rpm摇瓶发酵培养7d;/n步骤二,将发酵后的20L发酵液通过真空抽滤,使得菌丝体和上清液分离,分开后的菌体用3L去离子水冲洗;再用3L乙醇室温搅拌浸泡12h后离心,取上清液;/n步骤三,将HP-20树脂装入树脂柱,上清液加入到HP-20树脂柱进行动态吸附2次;吸附后用5L去离子水去除树脂上多余糖分,6L乙醇洗脱树脂,得到乙醇洗脱液;/n步骤四,浸提液和乙醇洗脱液分别在55℃下浓缩至干;取浓缩样品少量溶解,TLC薄层层析;将两份浓缩样混合在一起,得到总发酵粗提取膏体24.6g;/n步骤五,将步骤四所得发酵粗提物经100-200目硅胶柱层析,以氯仿/甲醇梯度洗脱,TLC薄层层析检测;/n步骤六,将相似流份合并浓缩后,进行LH-20凝胶柱层析,以甲醇/氯仿进行洗脱,经TLC薄层层析检测,再浓缩;/n步骤七,样品通过制备高效液相、半制备高效液相反向色谱进行化合物分离纯化,得7个化合物。/n
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