[发明专利]肾脏足细胞特异敲除lncRNA DLX6-os1转基因小鼠的培育方法有效
| 申请号： | 201910839052.0 | 申请日： | 2019-09-05 |
| 公开（公告）号： | CN110547256B | 公开（公告）日： | 2021-09-21 |
| 发明（设计）人： | 郭佳;刘章锁;余朴;雷敏;刘勇;郑文;杨菁;史嫣;朱宏超;冯其;路艳芳;李佳 | 申请（专利权）人： | 郑州大学第一附属医院 |
| 主分类号： | C12N15/115 | 分类号： | C12N15/115;C12Q1/686;A01K67/027 |
| 代理公司： | 郑州天阳专利事务所(普通合伙) 41113 | 代理人： | 蔡文雅 |
| 地址： | 450000 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明涉及肾脏足细胞特异敲除lncRNA DLX6‑os1转基因小鼠的培育方法，可有效解决在不同肾脏疾病中研究足细胞损伤的作用机制的问题，其解决的技术方案是，通过基因工程技术对前期建立的携带FLOX‑DLX6‑os1转基因小鼠与另一种携带足细胞特异的NPHS2‑Cre基因的转基因小鼠进行多代的繁殖杂交，实现肾脏足细胞特异敲除lncRNA DLX6‑os1转基因小鼠的培育，本发明为明确lncRNA DLX6‑os1在足细胞损伤中的作用提供了非常好的动物模型，有效解决在不同肾脏疾病中研究足细胞损伤的作用机制的问题，是转基因小鼠的培育方法上的创新。 | ||
| 搜索关键词： | 肾脏 细胞 特异 lncrna dlx6 os1 转基因 小鼠 培育 方法 | ||
【主权项】：
1.一种肾脏足细胞特异敲除lncRNA DLX6-os1转基因小鼠的培育方法，其特征在于，通过基因工程技术对前期建立的携带FLOX-DLX6-os1转基因小鼠与另一种携带足细胞特异的NPHS2- Cre基因的转基因小鼠进行多代的繁殖杂交，具体是：/n1）基因动物打靶培育F0代：将Southern blot验证基因为阳性的ES细胞用于基因打靶，即将基因敲除质粒载体导入ES细胞中，通过显微注射到囊胚中，再移植到代孕母鼠的子宫内发育下一代，获得携带FLOX-DLX6-os1的首建鼠F0代；/n2）F1代杂合子小鼠繁殖：利用携带FLOX-DLX6-os1的首建鼠与野生型小鼠交配，得到新生小鼠，剪鼠尾进行PCR作为基因鉴定，确定具有flox/+基因型的小鼠作为F1代杂合子；/n3）F2代组织特异性KO杂合子小鼠繁殖：将F1代杂合子小鼠与带有NPHS2-Cre 基因型的小鼠杂交，得到新生小鼠，剪鼠尾进行PCR作为基因鉴定，确定具有flox/+，NPHS2-Cre基因型的小鼠作为F2代组织特异性KO杂合子；/n4）纯合子足细胞特异敲除DLX6-os1的转基因小鼠繁殖：将F2代组织特异性KO杂合子相互交配，得到新生小鼠，剪鼠尾进行PCR作为基因鉴定，确定具有flox/flox，NPHS2-Cre基因型的小鼠作为组织特异性KO纯合子，即得足细胞特异敲除DLX6-os1的转基因小鼠。/n
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