[发明专利]一种羊抗鼠IgG抗体的纯化工艺在审
| 申请号： | 201910849627.7 | 申请日： | 2019-09-09 |
| 公开（公告）号： | CN110467670A | 公开（公告）日： | 2019-11-19 |
| 发明（设计）人： | 杨帆;刘向祎;曲林琳;张媛媛;王婷 | 申请（专利权）人： | 山东硕景生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/06 | 分类号： | C07K16/06;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/22;C07K1/34 |
| 代理公司： | 37266 潍坊中润泰专利代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 韩海波<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 261023 山东省*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种羊抗鼠IgG抗体的纯化工艺，包括以下步骤：S1、分级硫酸铵沉淀，S2、免疫亲和层析柱纯化。由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，本发明的优点是：先经硫酸铵分级沉淀，去除杂蛋白，提高抗体稳定性，提高层析柱的利用率，再结合免疫亲和层析法，进一步提高了抗体的特异性，降低了实验中的本底，获得高纯度，高效价的纯抗体，满足试剂生产的需要。 | ||
| 搜索关键词： | 抗体 硫酸铵分级沉淀 免疫亲和层析法 免疫亲和层析柱 抗鼠IgG抗体 抗体稳定性 硫酸铵沉淀 去除杂蛋白 层析柱 高纯度 高效价 分级 生产 | ||
【主权项】：
1.一种羊抗鼠IgG抗体的纯化工艺，其特征在于：包括以下步骤：/nS1、分级硫酸铵沉淀，包括以下步骤：/nS11、取羊抗鼠血清2体积份，分别加入PBS缓冲液1.8-2.2体积份和饱和硫酸铵溶液0.8-1.2体积份，充分混匀；/nS12、11000-13000r/min离心18-22min，弃沉淀，除去纤维蛋白；/nS13、上清中加入饱和硫酸铵溶液2.8-3.2体积份，充分混匀；/nS14、11000-13000r/min离心18-22min，弃上清；/nS15、沉淀中加入PBS缓冲液1.8-2.2体积份，再加入饱和硫酸铵溶液0.8-1.2体积份，充分混匀；/nS16、11000-13000r/min离心18-22min，弃上清，除去白蛋白；重复步骤S15，2-3次；/nS17、沉淀中加入PBS缓冲液0.8-1.2体积份，装入透析袋，放于PBS缓冲液中4℃透析24-48小时，直至无SO42-或NH4+检出为止；/nS18、2800-3200r/min离心18-22min，取上清用0.22um滤器过滤，即为粗纯的抗体；/nS2、免疫亲和层析柱纯化，包括以下步骤：/nS21、取粗纯的抗体1体积份，加入结合缓冲液0.8-1.2体积份；充分混匀，用0.22um滤器过滤；/nS22、制备免疫亲和层析柱，使用结合缓冲液冲洗；/nS23、免疫亲和层析柱中加入S21的产物，收集流出液，重复上样2-3次；/nS24、免疫亲和层析柱中加入洗杂缓冲液，收集洗杂液；/nS25、免疫亲和层析柱中加入洗脱缓冲液，收集洗脱液，即目的蛋白，洗脱液应立即用中和液调成中性；/nS26、浓缩；/nS27、将浓缩后的洗脱液装入透析袋，放入PBS缓冲液中透析2-3天；/nS28、2800-3200r/min离心18-22min，取上清用0.22um滤器过滤，即为纯的抗体。/n
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