[发明专利]一种重阳木的组培快繁方法

摘要

本发明提供了一种重阳木的组培快繁方法，其以重阳木带腋芽茎段或重阳木叶片为外植体进行组织培养繁育。当外植体为重阳木带腋芽茎段时，培养方法为：对芽茎段消毒，再将芽茎段置于诱导培养基中直接获得丛生苗，继而将丛生苗切成单个苗逐一接种在生根培养基上进行生根培养，最后将生根培养后的苗依次炼苗、移栽，实现重阳木的快速扩繁。当以重阳木的无菌叶片作为外植体时，培养方法为：对重阳木种子消毒，并进行无菌叶片的培养，接着以该无菌叶片为外植体，依次经过愈伤组织的诱导、愈伤组织分化、生根培养过程，建立重阳木组织培养快速繁殖体系。本发明操作简单、培育成本低、繁殖效率高，且受自然环境影响小，有很好的市场及产业化应用前景。

主权项

1.一种重阳木的组培快繁方法，其特征在于，以重阳木带腋芽茎段或重阳木叶片为外植体进行组织培养繁育；其中，当外植体为重阳木带腋芽茎段时，具体的培养繁育步骤如下：A1、外植体的获得与消毒：采摘新鲜的重阳木带腋芽茎段用洗衣粉冲洗0.5‑1.5min、流水冲洗0.5‑1.5h，接着于超净工作台中依次使用75％酒精漂洗25‑35s、无菌水冲洗3‑5次、1％次氯酸钠浸泡4‑6min，最后，再采用无菌水冲洗5‑7次；冲洗完毕，用无菌吸水纸将叶片上的水分吸干备用；A2、诱导培养：将吸干水分的重阳木带腋芽茎段于无菌条件下切块，并分别接种至丛生苗诱导培养基中进行丛生苗的诱导培养；其中，丛生苗诱导培养基的配方为：MS+1.8mg/L 6‑BA+0.5mg/L 2,4‑D，pH 5.8；A3、生根培养：将培养所得的丛生苗切为单个苗直接转接至生根培养基中进行生根培养；其中，生根培养基的配方为：1/2MS+0.3mg/L IBA，pH 5.8；当外植体为重阳木叶片时，具体的培养繁育步骤如下：B1、外植体的获得与消毒：①选取颗粒饱满的重阳木种子，将其浸泡到无菌水3‑5h，然后在超净工作台上用利用75％酒精迅速漂洗10‑20s，重复2‑4次，接着用4％次氯酸钠浸泡7‑9min，最后用无菌水冲洗3‑5次；冲洗完毕，用无菌吸水纸将种子上的水分吸干备用；②将吸干水分的重阳木种子于无菌条件下接种至无菌叶片培养基中进行无菌叶片的培养，培养所得的重阳木无菌叶片即为目标所需的外植体重阳木叶片；其中，无菌叶片培养基的配方为：1/2MS，pH 5.8；B2、愈伤组织诱导：将获得的重阳木无菌叶片于无菌条件下接种至愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织的诱导培养；其中，愈伤组织诱导培养基的配方为：MS+1.6mg/L 6‑BA+1mg/L 2,4‑D，pH 5.8；B3、愈伤组织分化：挑选愈伤组织，将其接种至分化培养基中进行愈伤组织分化培养；其中，分化培养基的配方为：MS+1.6mg/L 6‑BA+0.5mg/L 2,4‑D，pH 5.8；B4、生根培养：选取出苗一致的芽苗，切除其基部的愈伤组织，将丛生芽基部的愈伤组织切除，分割为单个芽，再将单个芽转接至生根培养基中培养，其中，生根培养基的配方为：1/2MS+0.3mg/L IBA，pH 5.8。