[发明专利]一种从临床血液中检测铜绿假单胞杆菌病原菌的方法在审
| 申请号： | 201910860770.6 | 申请日： | 2019-09-12 |
| 公开（公告）号： | CN110484639A | 公开（公告）日： | 2019-11-22 |
| 发明（设计）人： | 李敬;王旭;孙宝林;郭建;吴谨 | 申请（专利权）人： | 卓源健康科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12R1/385 |
| 代理公司： | 34120 合肥顺超知识产权代理事务所(特殊普通合伙) | 代理人： | 张芳<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 230088 安徽省合肥市高新区望*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种从临床血液中检测铜绿假单胞杆菌病原菌的方法，包括以下步骤：(1)血液中铜绿假单胞杆菌基因组DNA的提取；(2)PCR检测：a、利用铜绿假单胞杆菌基因组DNA序列设计特异性的PCR引物，PCR引物包括正向引物和反向引物；正向引物如SEQ ID NO.1所示；反向引物如SEQ ID NO.2所示；引物的扩增片段长度为187bp；b、以从血液中提取的铜绿假单胞杆菌基因组DNA为模板，采用PCR引物进行PCR扩增；c、对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳及检测，扩增出长度为187bp的片段则判定为检测出铜绿假单胞杆菌。本发明方法快速高效，特异性和灵敏度高，对血液中铜绿假单胞杆菌的检测极限达到10CFU/mL，在临床上具有十分广阔的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 铜绿假单胞杆菌 检测 基因组DNA 反向引物 正向引物 血液 病原菌 琼脂糖凝胶电泳 基因组DNA序列 扩增片段 临床血液 灵敏度 扩增 引物 判定 应用 | ||
【主权项】：
1.一种从临床血液中检测铜绿假单胞杆菌病原菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)血液中铜绿假单胞杆菌基因组DNA的提取；/n(2)血液中铜绿假单胞杆菌PCR检测：/na、利用铜绿假单胞杆菌基因组DNA序列设计一段特异性的PCR引物，所述PCR引物包括正向引物和反向引物；所述正向引物如SEQ ID NO.1所示：5’-GAGCTGCCGTACCAGTTGAA-3’；所述反向引物如SEQ ID NO.2所示：5’-GGGTCTGGGCATAGAGGTTG-3’；/n引物的扩增片段长度为187bp；/nb、以步骤(1)中从血液中提取的铜绿假单胞杆菌基因组DNA为模板，采用特异性的PCR引物进行PCR扩增；/nc、对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳及检测，扩增出长度为187bp的片段则判定为检测出铜绿假单胞杆菌。/n
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