[发明专利]一种五味子甲素纯度标准物质及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了五味子甲素纯度标准物质的制备方法。制备方法包括：从五味子药材中提取制备五味子甲素纯度标准物质的候选物；候选物的纯度分析和结构鉴定；候选物的均匀性检验；候选物的稳定性检验；候选物的纯度定值检测；不确定度评定；若纯度分析、结构鉴定、均匀性检验、稳定性检验和不确定度评定均满足要求，则制得五味子甲素纯度标准物质。本发明还提供由上述方法制备得到的五味子甲素纯度标准物质及其应用。本发明的五味子甲素纯度标准物质能作为标准物质用于准确检测由五味子和南五味子作为原料生产的相关产品中五味子甲素成分含量，为实现我国准确定量五味子甲素成分含量提供了具备可溯源性和量值传递功能的标准物质资源。

主权项

1.一种五味子甲素纯度标准物质的制备方法，其特征在于，包括：/n1)从五味子药材中提取制备五味子甲素纯度标准物质的候选物；/n1a.提取：将五味子药材粉碎，按质量比加入5～50倍的甲醇作为提取溶剂，于60℃至回流温度下提取1～10h，得提取液；/n1b.萃取：将提取液浓缩除去提取溶剂，加入0.5～5倍体积的正己烷萃取1～3次，合并正己烷层，得萃取液；/n1c.正相硅胶柱层析：将萃取液浓缩，上样，采用硅胶柱层析，用体积比正己烷：乙酸乙酯＝(5～7):1进行洗脱，合并含五味子甲素的洗脱液，浓缩，得浓缩物；/n1d.结晶：将浓缩物按每克加入0.2～1L甲醇并在加热下溶解，放置后有无色晶体析出，过滤；将过滤得到的晶体再按每克加入0.2～0.5L甲醇在加热下溶解，放置重结晶，过滤，干燥，即得五味子甲素候选标准物质；/n2)候选物的纯度分析和结构鉴定：确认该候选物是否是五味子甲素，确认该候选物的纯度是否不低于99.5％；如果纯度分析和结构鉴定符合要求，则进行均匀性检验；/n3)候选物的均匀性检验：如果候选物均匀性满足要求，则进行稳定性检验；/n4)候选物的稳定性检验：如果候选物稳定性满足要求，则进行纯度定值检测；/n5)候选物的纯度定值检测：/n5a.采用高效液相色谱面积归一化法测定所述五味子甲素原料中五味子甲素的质量百分含量，得出所述五味子甲素原料的纯度定值P_O；测定所述五味子甲素原料中的水分质量百分含量X_W、挥发性杂质质量百分含量X_V和非挥发性杂质质量百分含量X_e；按照如下公式I计算，得出五味子甲素纯度标准物质的纯度定值1，记为P_HPLC-AN；/n公式I：P_HPLC-AN＝P_o(1-X_W-X_V-X_e)/n其中，P_HPLC-AN为采用高效液相色谱面积归一化法测得的纯度定值1；P_O为五味子甲素原料的液相色谱法定值，X_W为水分质量百分含量，X_V为挥发性杂质质量百分含量，X_e为非挥发性杂质质量百分含量；/n5b.采用定量核磁法测定所述五味子甲素原料中五味子甲素的质量百分含量，所述定量核磁法采用内标法，内标物为尼泊金乙酯；按照如下公式II进行计算，得出五味子甲素纯度标准物质的纯度定值2，记为P_NMR；/n公式II：P_NMR＝I_x/I_Std·N_Std/N_x·M_x/M_Std·m_Std/m_x·P_Std，/n其中：P_NMR为采用定量核磁法测得的被测物的纯度定值2；I_x为样品指定峰的积分面积；I_Std为内标物指定峰的积分面积；N_Std为内标物指定峰的核群核个数；N_x为样品指定峰的核群核个数；M_x为样品的相对分子质量；M_Std为内标物的相对分子质量；m_Std为添加内标物的质量；m_x为样品称样量；P_Std为内标物的纯度；/n5c.计算所述纯度定值1和所述纯度定值2的平均值，即得五味子甲素纯度标准物质的纯度定值；/n6)不确定度评定：对候选物进行不均匀性引入的不确定度、不稳定性引入的不确定度、和标准物质的定值过程引入的不确定度进行评定；/n若纯度分析、结构鉴定、均匀性检验、稳定性检验和不确定度评定均满足要求，则制得五味子甲素纯度标准物质。/n