[发明专利]一种人体血清叶酸的测定方法

摘要

本发明公开了一种人体血清叶酸的测定方法，包括实验用水的制备、叶酸标准液配制、鼠李糖乳杆菌生长培养基配制、鼠李糖乳杆菌的制备、检测培养基配制、血清叶酸检测；本发明采用活性炭吸附水中的有机杂质，可以达到消除干扰的目的；叶酸的化学性质不稳定，容易被氧化，在生长和检测培养基中添加抗坏血酸作为抗氧化剂，使溶血液中的氧分尽量降低，从而增加脱氧血红蛋白的含量，达到保护叶酸的作用；检测时细胞培养板用封口膜封闭，有助于鼠李糖乳杆菌的生长，也能防止水分蒸发和叶酸的氧化；本发明简便易行、价格低廉、且灵敏度高，更适合大规模人群的叶酸筛查需要。

主权项

1.一种人体血清叶酸的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)实验用水的制备：去离子水中加入活性炭粉末，搅拌均匀，抽滤去除活性炭粉末，得到实验用水；/n(2)叶酸标准液配制：称取叶酸标准品，用氨水溶解并用实验用水定配制不同浓度的标准品溶液；/n(3)鼠李糖乳杆菌生长培养基配制：称取叶酸培养基干粉、抗氧化剂、氯霉素、硫酸锰放入烧杯中，加待标定的叶酸标准溶液和实验用水，混匀后加热至沸腾，然后高压灭菌，得到生长培养基，冷却后分装，-20℃冻存，用于菌种的制备；/n(4)鼠李糖乳杆菌的制备：将鼠李糖乳杆菌接种于生长培养基中，37℃培养箱内培养24h，2000r/min离心2-3min，弃去上清液，加入生长培养基，混匀后离心2-3min，弃去上清液，加入生长培养基，37℃培养箱内培养24h，取对数生长期菌液与80％甘油按1:1比例混合，混匀后分装于2mL冷冻管，-20℃冻存；/n(5)检测培养基配制：称取叶酸培养基干粉、氯霉素、硫酸锰放入烧杯中，加入实验用水，加热至沸腾，冷却后加入抗氧化剂、鼠李糖乳杆菌溶液，混匀；/n(6)血清叶酸检测：将血清用抗氧化剂稀释20倍在细胞培养板中，分别加入叶酸标准溶液，空白孔加浓度为0的标准溶液、浓度为3％的叠氮钠溶液，样品孔加稀释后的待检血清，向所有检测孔中加入检测培养基，封口膜封堵细胞培养板，将细胞培养板置37℃孵育36h后，混匀，撕开封口膜，静置5min，于酶标仪590nm比浊测定，选择合适的标准曲线拟合方式计算待检血清的叶酸浓度。/n