[发明专利]维生素D3对绵羊的免疫力和生殖功能的影响实验方法

摘要

本发明公开了维生素D3对绵羊的免疫力和生殖功能的影响实验方法，包括以下步骤：步骤一，试验动物分组与饲养；步骤二，绵羊组织取样；步骤三，绵羊组织总RNA提取；步骤四，cDNA合成；步骤五，细胞凋亡相关基因及VDR的引物设计；步骤六，荧光定量PCR；步骤七，数据统计与分析；对照组维生素D3的添加量为0IU/kg，试验组维生素D3的添加量分别为300IU/kg、600IU/kg、900IU/kg和1200IU/kg；该维生素D3对绵羊的免疫力和生殖功能的影响实验方法，通过微贮豆秸中添加不同浓度维生素D3饲喂绵羊探索研究维生素D3对绵羊细胞凋亡的作用机制，最后得出维生素D3添加水平在300IU/kg时有利于提高绵羊免疫力及降低组织细胞凋亡，实验过程严谨，结果可靠。

主权项

1.维生素D3对绵羊的免疫力和生殖功能的影响实验方法，包括以下步骤：步骤一，试验动物分组与饲养；步骤二，绵羊组织取样；步骤三，绵羊组织总RNA提取；步骤四，cDNA合成；步骤五，细胞凋亡相关基因及VDR的引物设计；步骤六，荧光定量PCR；步骤七，数据统计与分析；其特征在于：/n其中在上述步骤一中，试验动物分组与饲养包括以下步骤：/n1)选取25只2月龄的公绵羊，体重在20-25kg之间，随机分为5组，每组5个重复，每个重复1只绵羊；/n2)预饲期10d，试验期70d，所有分组均饲喂基础日粮和微贮豆秸，对照组维生素D3的添加量为0IU/kg，试验组维生素D3的添加量分别为300IU/kg、600IU/kg、900IU/kg和1200IU/kg；/n3)将豆秸揉搓成1-3cm的长度，将微生物菌剂、红糖和水混匀，然后均匀的撒在秸秆上，密封时用打包机器压紧密封打包，发酵一个月后即可开启使用微生物发酵豆秸；/n4)每只绵羊的日进食量根据绵羊的日增重随时进行调整，精粗比为1∶2(以干物质为基础)，试验期饲喂2次，以先粗后精顺序饲喂，自由饮水；/n其中在上述步骤二中，在试验期的最后一天，每组随机挑选4只绵羊进行屠宰取样，分别采集肝脏、肾脏、脾脏、胸腺和肠系膜淋巴置于冻存管中，放入液氮备用；/n其中在上述步骤三中，绵羊组织总RNA提取包括以下步骤：/n1)先将研钵进行高压灭菌，然后用液氮对其进行遇冷处理，随后迅速将绵羊组织从液氮中取出，置于研钵中研磨，将研碎的组织置于EP管中，加入适量Trizol，做好标记，用力震荡混匀，即可静置于冰上；/n2)将混合液置于4℃离心机中，离心10min；缓慢吸取上清，将其移入另一EP管中，室温孵育5min；加入200μL的氯仿，用力震荡混匀，4℃下离心15min；缓慢吸取上清，移入另一EP管，再加入等体积异丙醇，室温静置10min，4℃下离心10min，出现白色沉淀；/n3)弃去EP管中的异丙醇，加入适量1mL的冰乙醇，4℃下离心15min；弃去冰乙醇，于室温条件下干燥10min，加入适量20μL无菌RNase H