[发明专利]一种犬用乳酸菌及信号分子联用制剂及其制备方法

摘要

本发明公开了一种犬用乳酸菌及信号分子联用制剂及其制备方法，该制备方法包括以下步骤：培养乳杆菌；将乳杆菌冷冻离心处理，然后进行冷冻干燥处理，制备得到乳酸菌冻干粉；添加信号分子，制备得到乳酸菌及信号分子联用制剂；每日饲喂幼犬至28天；进行粪便评分，体重测定及血液指标测定，以评价该乳酸菌剂对幼犬体重的影响及对肠道的免疫激活作用。本发明所制的乳酸菌冻干粉可以改善幼犬的粪便评分，显著提升平均日增重，降低料重比，并对血液指标有一定的影响。

主权项

1.一种犬用乳酸菌及信号分子联用制剂的制备方法，其特征在于，所述联用制剂的制备方法包括以下步骤：/n1）培养乳酸菌：用移液枪吸取100~1000μL乳酸菌冻存液均匀涂布于固体培养基中，30~37℃静置培养至长出单菌落；在固体培养基中挑取单菌落，接种于液体培养基中，于30~37℃环境下静置培养24~48小时得到培养菌液，再将培养菌液与液体培养基按1：50~100的比例转接，继续30~37℃静置培养24~48小时，使得液体培养基中活菌浓度达到10⁸ CFU/mL；/n2）冷冻离心富集处理：将上述10~100 mL培养后的菌液转移至无菌离心管中，用离心机在4~10℃，转速4000~6000 g下离心3~7 min,弃上清，用0.85 %无菌生理盐水洗涤一次，离心去除液体，剩下菌泥，将菌泥重悬于1~10 mL冻干保护剂中获得悬菌液，使其浓度达到10⁹CFU/mL，再将其置于无菌西林瓶中，使用灭菌纱布进行封口；/n3）冷冻干燥处理：将装有悬菌液的西林瓶和真空冷冻干燥机配套的铁托盘在置于-40~ -80 ℃冰箱内预冻2~12 h；将装有悬菌液的西林瓶放置在铁托盘上，共同放入FDU-1100型号的真空冷冻干燥机，在-30 ~ -40 ℃，30~40 MPa下冷冻干燥24~48 h后，制备得到乳酸菌冻干菌粉；/n4）添加信号分子：将信号分子——液态2型自体诱导物（（S)-4,5-Dihydroxy-2,3-pentandione (DPD, Autoinducer 2)）用注射器吸取，并注射入上述盛有冻干菌粉的西林瓶中，使信号分子终浓度达到0.005 ~ 0.01 g/L，制备得到乳酸菌及信号分子联用制剂，并至于-20 ~ -80℃ 冰箱保存。/n