[发明专利]一种黄河鲤稚鱼肌间骨染色的方法

摘要

本发明公开了一种黄河鲤稚鱼肌间骨染色方法，具体过程为：用多聚甲醛固定黄河鲤稚鱼样品；用蒸馏水洗去PFA；用TBST浸泡稚鱼标本；用蒸馏水洗去残余的TBST；用KOH溶液透明黄河鲤稚鱼标本；更换新的KOH溶液，并滴加茜素红染色；倒掉染液，加入蒸馏水洗去浮色；将黄河鲤稚鱼转至双氧水的KOH溶液中，去除表面色素；用KOH溶液洗去残余的双氧水；将黄河鲤稚鱼转至甘油中梯度透明；在体式镜下拍照留存；将黄河鲤稚鱼转至100%甘油中保存。本发明使用最佳的试剂，通过对不同染色条件的探索，筛选出最优的染色条件，最终获得身体透明、肌间骨染色为红色或紫色的黄河鲤稚鱼优质标本，可用体式镜清楚的观察到肌间骨附着位置。

主权项

1.一种黄河鲤稚鱼肌间骨染色的方法，其特征在于具体过程为：/n（1）对出膜后22-26天的小鱼进行取材，并用3wt%-5wt%的PFA固定24小时，其中PFA是将3-5g的多聚甲醛溶于PBS中，pH调至7.2；/n（2）染色前先用蒸馏水漂洗鱼体，每次10分钟，漂洗三次，去除固定液；/n（3）再转移鱼体到TBST溶液中漂洗20-30分钟；/n（4）然后用蒸馏水漂洗10分钟，去除残余的TBST；/n（5）转移鱼体到1wt% KOH溶液，浸泡30分钟，根据鱼体过大程度适当延长时间，直至头部透明；/n（6）转移鱼体到新的1wt% KOH溶液中，再加入茜素红染液进行染色，KOH溶液与茜素红染液的体积比例为3:1，于19-31℃进行染色，染色时间8-12小时；/n（7）倒掉染色液，加入蒸馏水，洗去多余的染色液，重复洗1-2次，直至蒸馏水没有明显颜色；/n（8）用1wt% KOH溶液稀释双氧水，将双氧水稀释成体积浓度为1%-5%，在强光下照射，至鱼体表面出现大量气泡为止，脱去鱼体表面色素，此过程5-20分钟；/n（9）倒掉溶液，加入1wt% KOH溶液，洗去残余的双氧水；/n（10）将黄河鲤稚鱼放置体积分数20%、50%的甘油水溶液中梯度透明，透明0-30分钟；/n（11）用体式镜观察染色结果并拍照留存；/n（12）在100%甘油中保存黄河鲤稚鱼。/n