[发明专利]一种检测蛋白磷酸化和乙酰氨基葡萄糖化关联作用的方法有效
| 申请号： | 201910893435.6 | 申请日： | 2019-09-20 |
| 公开（公告）号： | CN110609078B | 公开（公告）日： | 2022-03-11 |
| 发明（设计）人： | 李舒伟;丁慧娜 | 申请（专利权）人： | 南京谱利健生物技术有限公司 |
| 主分类号： | G01N27/62 | 分类号： | G01N27/62;G01N1/28;G01N1/34;G01N1/40;C07D495/04 |
| 代理公司： | 南京众联专利代理有限公司 32206 | 代理人： | 吕书桁 |
| 地址： | 210033 江苏省南京市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种检测蛋白磷酸化和乙酰氨基葡萄糖化关联作用的方法，所述方法包括以下步骤：将胰蛋白酶处理得到的多肽样品平均分配成三等分，第一个等分用磷酸酶处理，用IBT‑10Plex116C标记；第二个等分用O‑乙酰葡萄糖胺水解酶处理，用IBT‑10Plex117N标记；第三等分无特殊处理，用IBT‑10Plex118N标记；样品混合，与氢氧化钡、一个含有生物素和巯基的双官能团化合物反应，通过链霉亲和素蛋白‑磁珠从混合物中被亲和富集；用紫外光光照除去含巯基化合物的其他结构，得到多肽衍生物用于质谱分析。本发明可以找出整个蛋白质组中同时具有磷酸化和O‑GlcNAcylation的Ser/Thr位点，为有氧糖酵解和信号转导通道之间的关系提供了具体数据，促进癌细胞特定生物标志物的发现，用于肿瘤的早期诊断以及治疗药物新靶点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 检测 蛋白 磷酸化 乙酰 氨基 葡萄 糖化 关联 作用 方法 | ||
【主权项】：
1.一种检测蛋白磷酸化和乙酰氨基葡萄糖化关联作用的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：/n1)将胰蛋白酶处理得到的多肽样品平均分配成三等分，将三等分分别进行以下处理：第一个等分用磷酸酶处理；第二个等分用O-乙酰葡萄糖胺水解酶处理；第三等分无特殊处理；/n2)第一等分用IBT-10Plex116C标记；第二等分用IBT-10Plex117N标记；第三等分用IBT-10Plex118N标记；IBT试剂可以与多肽的N-端胺基和C-端赖氨酸侧链胺基反应；/n3)将第二步处理后的三等分的样品混合，先与碱性溶液混合；然后与一个含有生物素和巯基的双官能团化合物反应，通过链霉亲和素蛋白-磁珠从混合物中被亲和富集；然后用紫外光光照除去该化合物的其他结构，得到多肽衍生物用于质谱分析。/n
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