[发明专利]一种针对II类VII型流行NDV株DHN3的感染性重组克隆方法有效
| 申请号： | 201910894754.9 | 申请日： | 2019-09-20 |
| 公开（公告）号： | CN110592108B | 公开（公告）日： | 2021-03-26 |
| 发明（设计）人： | 陈瑞爱;黄梅;王楠楠;李延鹏;刘定祥;叶俊贤;罗琼;杨小云;董楠 | 申请（专利权）人： | 华农（肇庆）生物产业技术研究院有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/45 | 分类号： | C12N15/45;C12N15/85;C12N15/66;C12N7/01 |
| 代理公司： | 广州市科丰知识产权代理事务所(普通合伙) 44467 | 代理人： | 龚元元 |
| 地址： | 526060 广东省肇庆市高新区创业路5*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明属于兽用生物制品技术领域，公开了一种针对II类VII型流行NDV株DHN3的重组克隆方法，包括如下步骤：步骤1：构建辅助质粒，所述辅助质粒为三种，辅助质粒上的目标片段分别为NP基因、P基因、L基因；步骤2：构建DHN3全基因组表达载体；将人工重组得到的DHN3全基因组重组入载体质粒中得到全基因组表达载体；DHN3全基因组的序列如序列表SEQ ID NO 1；步骤3：将三种辅助质粒和DHN3全基因组表达载体共转染BHK‑21细胞，得到含重组病毒rDHN3的病毒液；NP基因在序列表SEQ ID NO：1中位置为1‑1591nt；P基因在序列表SEQ ID NO：1中位置为1925‑3109nt；L基因在序列表SEQ ID NO：1中位置为8166‑15192nt。该方法可以成功的克隆出于原病毒株完全相同、无突变的重组病毒。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 针对 ii vii 流行 ndv dhn3 感染性 重组 克隆 方法 | ||
【主权项】：
1.一种针对II类VII型流行NDV株DHN3的感染性重组克隆方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤1：构建辅助质粒，所述辅助质粒为三种，辅助质粒上的目标片段分别为NP基因、P基因、L基因；/n步骤2：构建DHN3全基因组表达载体；将人工重组得到的DHN3全基因组重组入载体质粒中得到全基因组表达载体；DHN3全基因组的序列如序列表SEQ ID NO 1；/n步骤3：将三种辅助质粒和DHN3全基因组表达载体共转染BHK-21细胞，得到含重组病毒rDHN3的病毒液；/nNP基因在序列表SEQ ID NO：1中位置为1-1591nt；P基因在序列表SEQ ID NO：1中位置为1925-3109nt；L基因在序列表SEQ ID NO：1中位置为8166-15192nt。/n
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