[发明专利]一种从体外培养的细胞中提取细胞液的方法在审
| 申请号： | 201910904342.9 | 申请日： | 2019-09-24 |
| 公开（公告）号： | CN110577927A | 公开（公告）日： | 2019-12-17 |
| 发明（设计）人： | 齐智;房圆瑗;刘海英;巩俊廷 | 申请（专利权）人： | 山东甲骨文生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 11797 北京专赢专利代理有限公司 | 代理人： | 李斌 |
| 地址： | 255300 山东省淄博市*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种从体外培养的细胞中提取细胞液的方法，本发明提供的从体外培养的细胞中提取细胞液的方法，通过将器官组织中的细胞进行体外培养，细胞成分均一，没有其它成分影响细胞质的提取，在进行细胞质的提取时，可保持细胞质中各种细胞因子及活性蛋白的生物活性不损失。 | ||
| 搜索关键词： | 细胞质 体外培养 细胞 细胞液 成分影响 活性蛋白 器官组织 生物活性 细胞因子 均一 | ||
【主权项】：
1.一种从体外培养的细胞中提取细胞液的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1）在无菌环境下将去除血管和包膜组织的新鲜动物器官用手术剪将剩余组织剪碎；/n2）将剪碎的组织块放入离心管中，用两倍体积的37℃预温的磷酸盐缓冲液+0.25% 胰蛋白酶进行消化2min，液体浑浊时将组织消化液吸出转入另一离心管，加入2%的血清和胰蛋白酶中；未消化完成的组织块继续加入胰蛋白酶消化液进行消化，直至组织块全部消化成组织消化液；/n3）组织消化液经细胞筛过滤去除大块细胞团，然后进行一次离心处理；/n4）收集的细胞用RPM1640+10% 金源康胎牛血清重悬、计数，转入细胞瓶培养；/n5）选取可以传代的细胞进行扩大培养，达到一定数量后用胰蛋白酶消化、收集细胞，开始细胞质提取操作；/n6）细胞消化后用磷酸盐缓冲液重悬、计数，洗涤一至二次；/n7）取准备好的磷酸盐缓冲液+20%甘油，按照1~5 *107cells/ml的浓度对细胞进行重悬，并放入冰箱快速冷冻，1h后取出融化，重复三次后，进行二次处理，取上清，得细胞精华，即为细胞提取液。/n
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