[发明专利]基于多维指标针对长期堆煤对土壤细菌影响操作方法在审
| 申请号： | 201910908753.5 | 申请日： | 2019-09-25 |
| 公开（公告）号： | CN110714061A | 公开（公告）日： | 2020-01-21 |
| 发明（设计）人： | 马大卫;陈中元;王贻平;庄媛;张本耀;何军;葛源;黄齐顺;申聪聪;凌默侬;张其良;朱帅;程靖 | 申请（专利权）人： | 国网安徽省电力有限公司电力科学研究院;中国科学院生态环境研究中心 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 34144 合肥市泽信专利代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 方荣肖 |
| 地址： | 230000 安徽省*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了基于多维指标针对长期堆煤对土壤细菌影响操作方法，包括以下步骤：(1)研究区域选择及土壤样品采集；(2)土壤理化性质分析；(3)DNA提取、PCR扩增和Illumina MiSeq测序；(4)16S和18S测序数据的处理；(5)长期堆煤对土壤性质和微生物群落影响分析；通过上述步骤，能够分析电厂长期堆煤对土壤有机质和土壤细菌多样性的影响，对指导燃煤电厂煤堆场环境影响评价和土植被恢复具有重要意义。 | ||
| 搜索关键词： | 土壤细菌 环境影响评价 土壤理化性质 土壤有机质 微生物群落 测序数据 燃煤电厂 土壤性质 土壤样品 研究区域 影响分析 植被恢复 重要意义 煤堆场 测序 多维 电厂 分析 多样性 采集 | ||
【主权项】：
1.基于多维指标针对长期堆煤对土壤细菌影响操作方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤一：研究区域选择及土壤样品采集；/n从多个发电厂采集土壤样品，每个发电厂采集的样品分别进行DNA提取和测量土壤理化性质；/n步骤二：土壤理化性质分析；/n采用水土悬浮液，测量其pH值、土壤有机质、总氮、总磷、总钾含量，之后提取土壤溶解有机物质，随后将悬浮液离心，离心后获取其上清液，并通过无菌膜过滤，确定提取的土壤DOM的官能团，记录土壤DOM的三维激发-发射矩阵荧光光谱；/n步骤三：DNA提取、PCR扩增和IlluminaMiSeq测序；/n在步骤一种所采集的土壤中提取DNA，选择扩增16S rRNA基因V4区的引物组/n515F(5'-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA-3')和/n806R(5'-GGACTACVSGGGTATCTAAT-3')扩增原核生物的细菌和古细菌，引物组Euk1391F(5'-GTACACACCGCCCGTC-3')和EukBR(5'-TGATCCTTCTGCAGGTTCACCTAC-3')扩增18S rRNA基因以扩增真核谱系，对扩增进行测序；/n使用土壤微生物DNA强力提取试剂盒从上述采集的土壤中提取DNA，选择扩增16S rRNA基因V4区的引物组/n515F(5'-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA-3')和/n806R(5'-GGACTACVSGGGTATCTAAT-3')扩增原核生物的细菌和古细菌，引物组Euk1391F(5'-GTACACACCGCCCGTC-3')和EukBR(5'-TGATCCTTCTGCAGGTTCACCTAC-3')扩增18S rRNA基因以扩增真核谱系，再用荧光计定量后，在二代高通量测序平台上对扩增进行测序；/n步骤四：16S和18S测序数据的处理；/n测序获得的序列进行处理和分析，将低质量序列舍去，再将剩余的序列进行分类，并进一步分析；/n步骤五：长期堆煤对土壤性质和微生物群落影响分析；/n对草坪的测试对照组和煤场土之间的土壤性质进行比较，研究长期堆煤对土壤PH、总氮、总钾、总磷的影响。/n
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