[发明专利]一种鲜榨苹果汁的鉴伪方法

摘要

本发明公开了一种鲜榨苹果汁的鉴伪方法，首先将待测样品用组织裂解液与RNase裂解后，再用纳米硅基磁珠吸附DNA，用洗脱液洗脱吸附的DNA；然后将提取的DNA加入设计的特异性引物进行常规PCR扩增；扩增产物用琼脂糖凝胶电泳分析；观察电泳结果是否出现164bp条带；出现条带后将PCR扩增结果测序，测序结果输入NCBI查询与苹果的18SrRNA(登录号：DQ341382.1)的重复率，判断是否掺假；将提取的DNA加入设计的特异性进行实时荧光PCR扩增，扩增结果的Ct值代入掺假的线性回归方程，得出掺假量。本发明利用纳米硅基磁珠提取高浓度果汁DNA，样品无需前处理，操作方便，易于控制，且可以实现准确、高效的定性和定量的确定鲜榨苹果汁的掺假问题。

主权项

1.一种鲜榨苹果汁的鉴伪方法，其特征在于所述方法由下述步骤组成：/n(1)提取DNA/n将待测样品用组织裂解液与RNase裂解后，除去杂质，再用纳米硅基磁珠吸附DNA，最后用洗脱液洗脱磁珠吸附的DNA；/n(2)掺假鉴别/n以步骤(1)提取的DNA为模板，加入特异性引物进行常规PCR扩增，其中特异性引物的上游引物为：5’-AACGGCTACCACATCCAAGG-3’，下游引物为：5’-ACCAGACTTGCCCTCCAATG-3’；扩增产物用2％琼脂糖凝胶电泳分析，观察电泳结果是否出现164bp的条带；若电泳结果未出现该条带，说明样品不含苹果成分，为掺假样品；若电泳结果出现该条带，将测序结果输入NCBI查询与登录号为DQ341382.1的苹果18SrRNA的重复率，当重复率小于90％，说明样品不含苹果成分，为掺假样品，当重复率为90％以上，说明样品含有苹果成分；/n(3)确定掺假量/n(i)建立鲜榨苹果汁掺假线性回归方程/n将鲜榨苹果汁进行0.5％～70％的掺假，然后按照步骤(1)的方法提取各个掺假样品的DNA，分别以提取的DNA为模板，进行荧光定量PCR扩增，得到对应的Ct值，建立掺假量与Ct值的线性回归方程；/n(ii)待测样品中鲜榨苹果汁含量测定/n对步骤(2)中经过琼脂糖凝胶电泳分析确认含有苹果成分的样品，以该样品提取的DNA为模板进行荧光定量PCR扩增，得到对应的Ct值，将该Ct值代入上述掺假量与Ct值的线性回归方程中，经计算得到鲜榨苹果汁含量。/n