[发明专利]一种高产量甲型H3N2流感病毒抗体的制备方法在审
| 申请号： | 201910920441.6 | 申请日： | 2019-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN110684103A | 公开（公告）日： | 2020-01-14 |
| 发明（设计）人： | 卢晓露;李海明;郑卓君 | 申请（专利权）人： | 广东京豪生物制药有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/10 | 分类号： | C07K16/10;C07K16/02;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/18 |
| 代理公司： | 44228 广州市南锋专利事务所有限公司 | 代理人： | 刘媖 |
| 地址： | 510653 广东省广州市天河*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种高产量甲型H3N2流感病毒抗体的制备方法。包括以下工艺方法：在蛋鸡20周龄及以后，在每日普通饲料中添加3‑7%海藻粉和4‑7%蝗虫粉；制备甲型H3N2流感病毒免疫抗原、免疫产蛋母鸡，获得免疫鸡蛋、从免疫鸡蛋蛋黄液水稀释法提取甲型H3N2流感病毒抗体粗品；并对粗品进行纯化、冷冻喷雾干燥处理后，制得甲型H3N2流感病毒抗体，并进行纯度、活性检测。该工艺方法通过在鸡饲料中增加蝗虫粉和海藻粉，提高了甲型H3N2流感病毒抗体产量，并且使用蝗虫粉具有环境保护和良好的经济效益，本方法成本低、产量高、具有高特异性，可实现产业化。 | ||
| 搜索关键词： | 甲型H3N2流感病毒 抗体 蝗虫粉 免疫鸡蛋 海藻粉 粗品 制备 冷冻喷雾干燥 免疫产蛋母鸡 活性检测 免疫抗原 水稀释法 产业化 蛋黄液 鸡饲料 蛋鸡 环境保护 饲料 | ||
【主权项】：
1.一种高产量甲型H3N2流感病毒抗体的制备方法，其特征在于包括以下工艺方法：/n蛋鸡饲养：在蛋鸡20周龄及以后，在每日普通饲料中添加3-7%海藻粉和4-7%蝗虫粉；/n蛋鸡免疫：制备甲型H3N2流感病毒，确定TCID50值，稀释后等比例混合、乳化制成甲型H3N2流感病毒免疫抗原，用甲型H3N2流感病毒抗原免疫蛋鸡；/n卵黄抗体IgY的提取纯化：鸡蛋外壳消毒，敲破，去除蛋清及鸡蛋黄膜，留取蛋黄部分，加入1:6-12纯化水，调节pH为5.2-6.0，4℃静置过夜，离心，取上清液，加入上清液质量4-8%PEG66000或者硅藻土，充分搅拌后，在10℃下离心，倾去上清液，沉淀部分为抗甲型H3N2流感病毒特异性鸡卵黄抗体粗品；/n用0.075mol/L PBS平衡DEAE-TOYOPEAL 650M离子交换树脂，用0.075mol/L PBS溶解粗品，蛋白浓度约为20mg/ml，每次上样约200ml；/n上样后先用平衡缓冲液将未与填料结合的杂蛋白洗脱下来，然后用0.15mol/l的pH为7.0的PBS缓冲液洗脱；/n透析脱盐后冷冻干燥，即得卵黄抗体纯品，4℃保存；/n抗体回收率70.3-71.4%，所得抗体成品纯度94.8-95.5%。/n
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