[发明专利]一种同时检测黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的电化学方法

摘要

本发明属于生物传感器和电化学检测领域，涉及一种同时检测黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的电化学方法；步骤为：首先制备得到丝网印刷电极；然后制备得到AFB1适配体与OTA适配体修饰电极，再将适配体修饰电极依次浸入AFB1、OTA、Tris‑HCl缓冲溶液配制的标准溶液和AFB1适配体互补链、OTA适配体互补链、Tris‑HCl缓冲溶液的混合液；最后，根据二茂铁的峰电流值、亚甲基蓝的峰电流值与AFB1和OTA浓度的关系，分别建立标准曲线；通过检测待测液的二茂铁和亚甲基蓝的峰电流值，即可实现样品中AFB1和OTA的同时检测；本发明能够对两种目标物同时检测，操作简便，并具有高灵敏度和高选择性。

主权项

1.一种同时检测黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的电化学方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)制备得到丝网印刷电极，所述丝网印刷电极包括对电极、工作电极一、工作电极二和参比电极；/n(2)适配体修饰电极的制备；/nS1、首先，将步骤(1)制备的丝网印刷电极浸入氯金酸溶液中，在丝网印刷电极的2个工作电极上施加恒定电位，保持一段时间后，取出丝网印刷电极，再次置于硫酸溶液中，进行循环伏安扫描，活化金纳米粒子，得到金纳米粒子修饰的丝网印刷电极；/nS2、取三(2-羧乙基)膦盐酸盐溶液与AFB1适配体储备液混合反应得到混合溶液A；再取三(2-羧乙基)膦盐酸盐溶液与OTA适配体储备液混合反应得到混合溶液B；使用Tris-HCl缓冲溶液，将混合溶液A和混合溶液B分别稀释至一定浓度；/nS3、取S2中稀释后的混合溶液A滴涂于S1中得到的金纳米粒子修饰的丝网印刷电极工作电极一的表面；再取S2中稀释后的混合溶液B，滴涂于S1中浸泡后的丝网印刷电极工作电极二的表面，在一定温度条件下静置一段时间后，使用Tris-HCl缓冲溶液冲洗工作电极一和工作电极二的表面，冲洗后分别在工作电极一和工作电极二的表面滴涂巯基己醇溶液，在恒温条件下保存一段时间，再用Tris-HCl缓冲溶液冲洗工作电极一和工作电极二的表面，冲洗后得到适配体修饰电极；/n(3)将AFB1和OTA加入Tris-HCl缓冲溶液中，配制不同浓度的标准溶液；取若干个步骤(2)制备的适配体修饰电极分别浸入不同浓度的标准溶液中，在恒温条件下保存一段时间；然后取出适配体修饰电极，再次浸入AFB1适配体互补链、OTA适配体互补链和Tris-HCl缓冲溶液组成的混合溶液C中，在一定温度条件下静置一段时间；/n最后，取出适配体修饰电置于电解池中，以磷酸缓冲溶液为电解质，通过差分脉冲伏安法记录OTA适配体互补链所修饰的亚甲基蓝和AFB1适配体互补链所修饰的二茂铁的电信号；依据伏安图谱中二茂铁的峰电流值与AFB1浓度的关系、以及亚甲基蓝的峰电流值与OTA浓度的关系，分别建立标准曲线；/n(4)样品检测：首先将样品粉碎，获得样品粉末，加入乙醇溶液中，充分震荡，离心后收集上清液，与Tris-HCl缓冲溶液混合，得到样品提取液；然后，使用步骤(2)所制备的适配体修饰电极，按照步骤(3)中的操作，区别是将配制标准溶液的AFB1和OTA替换为所要检测的样品提取液，获得样品提取液的伏安曲线，得到伏安曲线中二茂铁和亚甲基蓝的峰电流值，代入步骤(3)中所建立的标准曲线方程中，即可实现样品中AFB1和OTA的同时检测。/n