[发明专利]一种基于细菌內源末端连接系统的基因组编辑方法在审
| 申请号： | 201910922002.9 | 申请日： | 2019-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN110628761A | 公开（公告）日： | 2019-12-31 |
| 发明（设计）人： | 霍毅欣;黄潮勇 | 申请（专利权）人： | 北京理工大学;苏州工业园区洛加大先进技术研究院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12N9/22;C12N15/70 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100081 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 细菌是代谢工程中的主要宿主，基因组编辑是细菌工程改造的主要途径，而现有的针对细菌的基因组编辑方法都需要过表达外源的同源重组系统或非同源末端连接系统。本发明公开了一种基于细菌內源末端连接系统的基因组编辑方法。本发明所提供的基因组编辑方法是按照包括以下步骤进行：构建一个双质粒基因组编辑系统，通过转化将该系统导入待编辑的菌株。将含有基因组编辑系统的菌株在液体培养基中培养使其进行繁殖，待细胞数目足够时加入诱导剂诱导CRISPR/Cas9系统表达，随后发生DNA双链切割和修复，实现基因组编辑。本发明先通过细胞繁殖增加细胞的数量和活性再启动基因组编辑，显著提高了基因组编辑效率，并成功在大肠杆菌中实现了基因敲除和大片段删除。 | ||
| 搜索关键词： | 基因组 细菌 编辑系统 菌株 非同源末端连接 同源重组系统 液体培养基 大肠杆菌 宿主 细胞 代谢工程 工程改造 基因敲除 末端连接 细胞繁殖 双质粒 诱导剂 再启动 构建 外源 切割 删除 诱导 繁殖 修复 大片 转化 成功 | ||
【主权项】：
1.一种基于细菌內源末端连接系统的基因组编辑方法，其特征是将负载了基因组编辑系统的质粒转化至宿主细胞之后先不启动基因组编辑系统，而是通过细胞繁殖增加细胞的数量和活性，细胞繁殖一段时间之后再启动基因组编辑系统，通过CRISPR/Cas9系统对DNA的切割和內源末端连接系统对DNA的修复实现对细菌基因组的高效编辑。/n
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