[发明专利]一种效率高且成本低的无缝DNA组装方法在审
| 申请号： | 201910923589.5 | 申请日： | 2019-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN110592130A | 公开（公告）日： | 2019-12-20 |
| 发明（设计）人： | 霍毅欣;王雪芹;黄潮勇 | 申请（专利权）人： | 北京理工大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100081 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明对大肠杆菌DH10B进行工程改造，敲除基因组上的recB‑recC‑rec‑D基因并过表达基因组上的recE‑recT基因后得到性能优良的重组工程宿主菌株DH10B*，将1–3个带有20bp–40bp同源序列接头的DNA片段共转入该细胞即可体内组装成完整质粒，平板上形成的菌落阳性率高于95％。该方法与现有无缝DNA组装方法相比，省去了昂贵并且费时的体外连接操作，实现了高效率、低成本、低耗时的无缝DNA组装，在分子生物学实验中具有很大的应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 组装 基因组 分子生物学实验 大肠杆菌DH10B 工程宿主菌 工程改造 体外连接 同源序列 低成本 高效率 阳性率 菌落 敲除 质粒 体内 转入 细胞 基因 应用 | ||
【主权项】：
1.一种效率高且成本低的无缝DNA组装的方法，其特征是对商用大肠杆菌菌株进行工程改造，在增强其重组活性的同时减弱对外源线性DNA的降解活性，将带有同源序列接头的DNA片段共转入改造后的工程菌株即可组装成完整质粒。/n
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