[发明专利]一种蛋白表达及纯化的方法在审
| 申请号： | 201910955181.6 | 申请日： | 2019-10-09 |
| 公开（公告）号： | CN110628801A | 公开（公告）日： | 2019-12-31 |
| 发明（设计）人： | 崔格特 | 申请（专利权）人： | 武汉博欧特生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/66;C07K1/22 |
| 代理公司： | 42247 武汉红观专利代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 张文俊 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖开发区高新大道*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种蛋白表达及纯化的方法，首先构建含有绿色荧光蛋白gfp基因的表达载体，将目的蛋白基因插入该表达载体中，再将含有绿色荧光蛋白GFP和目的蛋白融合基因的表达载体转入表达菌株中诱导表达，通过在荧光显微镜下观察表达菌株是否发出绿色荧光来判断融合蛋白是否被成功表达。表达出融合蛋白后，通过亲和层析纯化的方法获得纯融合蛋白，蛋白酶切除GFP蛋白，获得纯目的蛋白。该方法可以直观检测目的蛋白的表达情况，方便快捷，且纯化蛋白的效果好。 | ||
| 搜索关键词： | 表达载体 目的蛋白 融合蛋白 绿色荧光蛋白gfp 表达菌株 目的蛋白基因 亲和层析纯化 蛋白酶 荧光显微镜 纯化蛋白 蛋白表达 绿色荧光 融合基因 诱导表达 直观检测 构建 切除 转入 基因 观察 成功 | ||
【主权项】：
1.一种蛋白表达的方法，其特征在于，包括如下步骤：/nS1、绿色荧光蛋白gfp基因的扩增，扩增上游引物设置有编码烟草蚀纹病毒蛋白酶识别位点的序列，gfp基因核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；/nS2、将步骤S1所述gfp基因连接到质粒pET-28a上，得到表达载体pET-28a-gfp；/nS3、扩增编码目的蛋白X的基因x；/nS4、将步骤S3所述基因x连接到表达载体pET-28a-gfp上，得到表达载体pET-28a-x-gfp；/nS5、将表达载体pET-28a-x-gfp转入表达菌株中诱导表达融合蛋白X-GFP。/n
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