[发明专利]测定酶活性的方法在审
| 申请号： | 201910955993.0 | 申请日： | 2019-10-10 |
| 公开（公告）号： | CN110760563A | 公开（公告）日： | 2020-02-07 |
| 发明（设计）人： | 马龙华;李宁;顾好粮;李晓雯;高利艳;沈鹏飞;王晓东;孙斌;王利;刘松坡;谢文君;邹飞青;龙皎;张杰 | 申请（专利权）人： | 北京东西分析仪器有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/37 | 分类号： | C12Q1/37 |
| 代理公司： | 11640 北京中索知识产权代理有限公司 | 代理人： | 周国勇 |
| 地址： | 102308 北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明适用于酶检测技术领域，提供了一种测定酶活性的方法，包括以下步骤：S1：对金属蛋白酶的酶切底物进行重组蛋白纯化；S2：对酶彻底物进行酶切反应；S3：读取酶切反应后的金属靶板，并对样本内的酶切活性进行计算。借此，本发明灵敏度、准确性好，操作简便，价格便宜，应用范围广泛。 | ||
| 搜索关键词： | 酶切反应 读取 重组蛋白纯化 测定酶活性 金属蛋白酶 金属靶板 酶切底物 酶切活性 灵敏度 酶检测 样本 应用 | ||
【主权项】：
1.一种测定酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1：对金属蛋白酶的酶切底物进行重组蛋白纯化；/n将氨基酸片段以及其末端的组氨酸插入到细菌表达载体上并进行克隆，然后对细菌进行收集后对其进行裂解，裂解完成后进行离心处理，并对离心处理后的细菌进行上清收集，然后加入等体积的缓冲液进行稀释，利用还原性离子柱对稀释后的液体进行洗脱，进而得到所需的酶彻底物；/nS2：对酶彻底物进行酶切反应；/n将酶彻底物用反应缓冲液进行稀释，然后取其血清标准物，与所测血清样本进行稀释后的底物溶液进行混合，将混合后的液体进行孵育，对孵育后的溶液加热至预设温度后终止反应；/nS3：读取酶切反应后的金属靶板，并对样本内的酶切活性进行计算；/n取所需要的富集有酶切产物的金属靶板，加入激活缓冲液后震荡孵育，然后对金属靶板冲洗后，加入结合缓冲液首次震荡孵育，吸去靶板上的残留液后，在靶板上加入步骤S2中的样本，然后再次震荡孵育并进行冲洗，最后取出靶板吸干残留溶液后，加入基质并利用仪器进行靶板读取，利用读取的峰面积对酶切活性进行计算。/n
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