[发明专利]一种外周血T细胞的体外扩增培养方法有效
申请号: | 201910965432.9 | 申请日: | 2019-10-11 |
公开(公告)号: | CN110747166B | 公开(公告)日: | 2021-07-09 |
发明(设计)人: | 刘文;夏琳;郑早早;刘珺懿;陈宇洁 | 申请(专利权)人: | 厦门大学 |
主分类号: | C12N5/0783 | 分类号: | C12N5/0783 |
代理公司: | 厦门市首创君合专利事务所有限公司 35204 | 代理人: | 张松亭;姜谧 |
地址: | 361000 *** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | 本发明公开了一种外周血T细胞的体外扩增培养方法,其培养基由基本培养基、胎牛血清、白介素‑2、白介素‑15、人CD3单克隆抗体和人CD28单克隆抗体组成。本发明从外周血中分离得到的T细胞,经过一个周期的激活与扩增培养,即可获得足够体外功能实验的细胞量,经过7天的扩增,T细胞数量达到起始量的40‑50倍,经过14‑22天的扩增,细胞数量更是可达到起始量的80‑200倍,对于难扩增的CAR‑T细胞,更是能在体外感染后第22天扩增至起始量的60‑80倍,其数量远远多于初始分离量。本发明中T细胞以及CAR‑T细胞的激活/扩增是通过培养基中的单克隆抗体及细胞因子的刺激实现的,不需要抗原呈递细胞或特异性抗原或磁珠,操作简单,培养成本大幅下降。 | ||
搜索关键词: | 一种 外周血 细胞 体外 扩增 培养 方法 | ||
【主权项】:
1.一种外周血T细胞的体外扩增培养方法,其特征在于:包括如下步骤:/n(1)在无血清免疫细胞培养基X-VIVO 15中加入9-11%的胎牛血清,再加入白介素-2、白介素-15、人CD3单克隆抗体和人CD28至终浓度依次为50-100μg/L、50-100μg/L、10-50μg/L和10-50μg/L,获得外周血T细胞体外扩增培养基;/n(2)采用肝素抗凝常规采血手段采集血液;/n(3)使用Ficoll密度梯度离心法从采集到的上述血液中离心分离出数量为1.8-2.2×10
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