[发明专利]一种碱冻融体系预处理几丁质提高几丁质降解率的方法

摘要

本发明公开了一种碱冻融体系预处理几丁质提高几丁质降解率的方法。该方法包括如下步骤：（1）利用微生物发酵获得几丁质酶；（2）称取适量几丁质，加入碱溶液中并搅拌分散，在适宜冻融模式处理下，取出室温融化，煮沸析出几丁质后离心去上清，利用PBS（pH 7.0）缓冲液搅拌重悬，清洗pH至中性；（3）吸取预处理几丁质和几丁质酶于水浴锅中反应，反应结束后，测定还原糖含量。与现有技术相比，本发明方法通过改性处理几丁质，提高几丁质与其酶的附着力，转化效率是未处理的11.01倍，且用时间较短，操作简单，污染较小，具有广阔的应用前景。

主权项

1.一种碱冻融体系预处理几丁质提高几丁质降解率的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤1，微生物发酵产几丁质酶，并获得浓缩酶液/n将产几丁质酶的菌株接种至种子液培养基中，37℃、200rpm 条件下培养12 h，再以体积分数5% 的接种量接入装有产酶发酵培养基的摇瓶中，26℃，200 rpm，初始pH7.5的条件下发酵72 h后收集发酵液，并于4℃、8000 rpm下离心，分离菌体，收集上清液，即得几丁质酶粗酶液；/n步骤2，碱冻融体系预处理几丁质/n称取质量不超过反应体系4%的几丁质粉末，加入质量分数为4%～20%碱液混合均匀，混合溶液于-20℃～-80℃中冻融1～3次，累计冷冻时间6 h～24 h，每次冻融后均需取出在室温融化，并搅拌至冰水混合态，再重复冻融操作，待最后一次冻融融化后煮沸5～30 min充分析出几丁质后离心并回收上清碱液，再向析出的几丁质中加入PBS缓冲液搅拌重悬，重复离心去上清液，重复重悬，直至重悬后几丁质悬浊液呈中性；/n步骤3，碱冻融体系辅助酶法降解几丁质与几丁质酶直接降解几丁质/n吸取等量几丁质悬浊液和几丁质酶液于水浴锅中，37℃下反应0.5～3 h后，测定还原糖含量，计算几丁质的降解率。/n