[发明专利]一种梅鱼加工副产品的抗真菌肽的制备方法

摘要

本发明涉及生物技术提取领域，针对现有技术的抗真菌肽抗菌活性较低及抑菌种类有限的问题，公开了一种梅鱼加工副产品的抗真菌肽制备方法，包括以下步骤：（1）、预处理；（2）、酶解；（3）、过滤得澄清液；（4）、分离纯化；（5）、多肽分级；（6）、培养观察抑菌圈。本发明提供了一种梅鱼加工副产品的抗真菌肽制备方法，该抗真菌肽具有较高的抗菌活性，且是初次从梅鱼中提取抗真菌肽；该抗真菌肽是从梅鱼的加工副产品鱼头中进行提取，实现废物再利用，成本较低；丰富了抗真菌肽的种类，能更好的对食品进行保质保鲜，助于了解利用梅鱼副产物蛋白质水解后的抗真菌肽保存食物、防止腐败和病原微生物。

主权项

1.一种梅鱼加工副产品的抗真菌肽的制备方法，其特征是，包括以下制备步骤：/n（1）、预处理：将梅鱼鱼头进行清洗后绞碎，在料液比为1:6-9 (m/v)，温度为48-52℃的条件下，用94-96%的甲醇水浴脱脂2-2.2h；脱脂后将上清液倒掉，用纯水将沉淀洗净，将脱脂鱼肉在0-4℃、11900-12000 r/min条件下离心20-25min，收集沉淀；/n（2）、酶解：将鱼肉加到含有中性蛋白酶的酶解液中进行酶解；其中，中性蛋白酶的浓度为0.05-0.25wt%，酶解液质量为鱼肉质量的2-4倍，酶解温度为30-45℃，酶解液pH至控制在5-6，酶解时间为5-5.4h；/n（3）、过滤得澄清液：向酶解液中添加质量为酶解液1-2wt%的改性果木活性炭，并将酶解液加热并脱色；将脱色后的酶解液转移至板框过滤池内进行过滤，取澄清液；/n（4）、分离纯化：将澄清液鼓气起泡，并收集泡沫液，在鼓气的同时注水；待收集的泡沫液灭泡后，对泡沫液进行重金属分离；向重金属分离后的泡沫液中添加质量为泡沫液1-2%的磁性亲和微球并分散均匀，静置亲和吸附50-60min后利用磁场使磁性亲和微球聚集；分离出磁性亲和微球后，用pH值为7-7.2的缓冲液对磁性亲和微球进行洗脱，得到洗脱液，再将洗脱液的pH调至6-8之间，然后用乙酸乙酯提取，并于35-40℃下进行蒸干浓缩，使得浓缩液浓度为25-30%；/n（5）、多肽分级：采用膜对浓缩液按分子量进行分离，得到目标分子量的抗真菌肽；/n（6）、培养观察抑菌圈：琼脂扩散法筛选多肽的抗真菌活性，将肽物质添加至含有黑曲霉标准菌株的培养基，观察抑菌区域，测量抑菌直径。/n