[发明专利]一种利用沙雷氏菌提纯碱性金属蛋白酶的工艺方法在审
| 申请号： | 201910981802.8 | 申请日： | 2019-10-16 |
| 公开（公告）号： | CN110607294A | 公开（公告）日： | 2019-12-24 |
| 发明（设计）人： | 张国基;张希兰;汤燕雯;赵甜 | 申请（专利权）人： | 佛山市金净创环保技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/52 | 分类号： | C12N9/52 |
| 代理公司： | 44463 佛山粤进知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 张敏 |
| 地址： | 528000 广东省佛山市南海区桂城街道*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用沙雷氏菌提纯碱性金属蛋白酶的工艺方法，包括以下步骤：将黏质沙雷氏菌发酵培养，获得粗酶液；用硫酸铵沉淀粗酶液后，用缓冲液溶解、透析；用无菌的去离子水分别将Q Sephacryl Fast Flow和Sephacryl S100 HR溶胀、脱气；在预制Q Sephacryl Fast Flow色谱柱上样，用Tris‑HCl平衡液冲洗，用不同浓度的NaCl进行梯度洗脱，用超滤管，缓冲液进行脱盐，用不同浓度的NaCl进行梯度洗脱，用超滤管脱盐、浓缩；上样至Sephacryl S100 HR柱，用洗脱液清洗，收集洗脱峰，用超滤管浓缩，即得到碱性金属蛋白酶。从黏质沙雷氏菌的分泌蛋白中分离抗病毒活性的蛋白质类物质，筛选具有良好抗病毒效果、性质稳定的蛋白，丰富抗病毒活性物质的种类，为植物病毒病防治药剂的研究提供理论依据。 | ||
| 搜索关键词： | 沙雷氏菌 超滤管 蛋白酶 碱性金属 梯度洗脱 粗酶液 缓冲液 上样 脱盐 植物病毒病防治药剂 抗病毒活性物质 浓缩 蛋白质类物质 抗病毒活性 抗病毒效果 硫酸铵沉淀 发酵培养 分泌蛋白 去离子水 性质稳定 平衡液 色谱柱 洗脱峰 洗脱液 提纯 溶胀 透析 脱气 无菌 冲洗 预制 清洗 溶解 蛋白 筛选 研究 | ||
【主权项】：
1.一种利用沙雷氏菌提纯碱性金属蛋白酶的工艺方法，其特征在于，包括以下步骤：/n用无菌的去离子水分别将Q Sephacryl Fast Flow和Sephacryl S100HR溶胀、脱气；/n在预制Q Sephacryl Fast Flow色谱柱上样，用pH 4.0-9.0、20mmol/L的Tris-HCl平衡液冲洗，用不同浓度的NaCl进行梯度洗脱，用超滤管，pH 7.2、10mmol/L的PBS缓冲液进行脱盐，用不同浓度的NaCl进行梯度洗脱，用超滤管脱盐、浓缩；/n将黏质沙雷氏菌发酵培养，获得粗酶液；/n用硫酸铵沉淀粗酶液后，用pH 7.2、10mmol/L PBS缓冲液溶解、透析；/n上样至Sephacryl S100HR柱，用pH 7.2、10mmol/L的PBS洗脱液清洗，收集洗脱峰，用超滤管浓缩，即得到碱性金属蛋白酶。/n
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