[发明专利]一种兽用水溶性壳聚糖脂质体佐剂的制备方法

摘要

本发明公开了一种兽用水溶性壳聚糖脂质体佐剂的制备方法，本发明的佐剂包括磷脂、胆固醇、蜂胶、壳聚糖盐酸盐、戊二醛，通过本发明制备得到的兽用水溶性壳聚糖脂质体佐剂粒径小，均一性好，具有较好的热稳定性和良好的细胞相容性，贮存稳定性高，久置不分层，极大消除了佐剂中有机溶剂残留的风险，可以延长高水平抗体在体内的维持时间。

主权项

1.一种兽用水溶性壳聚糖脂质体佐剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n（1）将磷脂和胆固醇均溶解在三氯甲烷中混合后得到混合溶液A；/n（2）按照蜂胶：95％的乙醇=1kg：（15-25）L的比例，将蜂胶溶于95％的乙醇中配制成蜂胶乙醇溶液；/n（3）步骤（1）中得到的混合溶液A与步骤（2）中得到的蜂胶乙醇溶液按照体积比1：（1-3）进行均匀混合，得到混合溶液B；/n（4）将步骤（3）中得到的混合溶液B转移至旋转蒸发仪中，进行真空旋转蒸发除去有机溶剂，旋转蒸发仪烧瓶内壁形成脂质膜；/n（5）用去离子水洗下步骤（4）中旋转蒸发仪烧瓶内壁的脂质膜，混匀溶液后得到混合溶液C；/n（6）使步骤（5）中得到的混合溶液C在40-60℃温度下、在功率150-250W的超声处理下、在压力为12-16Mpa的二氧化碳气氛下孵化0.5-1.5h，得到蜂胶脂质体溶液；/n（7）将壳聚糖盐酸盐用去离子水溶解后制得壳聚糖盐酸盐溶液，壳聚糖盐酸盐溶液与步骤（6）中制得的蜂胶脂质体溶液按照等体积比例进行均匀混合，在（500-700）r/min的条件下结合0.5-1.5h；/n（8）微球制备处理；以重量份计，取步骤（7）中处理得到的溶液5-15份加入50-100份液体石蜡（含3%（质量分数）Span 80）中，40-60℃恒温水浴条件下800-1500r/min搅拌20-60min，形成白色W/O乳液，逐滴加入戊二醛水溶液交联，继续搅拌2-5h；石油醚、异丙醇充分洗涤沉淀后离心分离，真空干燥，即得；/n所述磷脂：胆固醇：三氯甲烷：壳聚糖盐酸盐的重量份比例为：（75-100）：（25-100）：（10-15）：（15-20）。/n