[发明专利]中华乌塘鳢卵黄蛋白原重组表达及纯化方法有效
| 申请号： | 201911059553.3 | 申请日： | 2019-11-01 |
| 公开（公告）号： | CN110655565B | 公开（公告）日： | 2021-08-17 |
| 发明（设计）人： | 周克夫;孟坤;龙敏 | 申请（专利权）人： | 厦门大学 |
| 主分类号： | C07K14/46 | 分类号： | C07K14/46;C07K1/22;C07K16/18;C12N15/12;C12N15/70;A61P31/04;A61P31/10;G01N33/68 |
| 代理公司： | 厦门南强之路专利事务所(普通合伙) 35200 | 代理人： | 马应森;戴深峻 |
| 地址： | 361005 *** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 中华乌塘鳢卵黄蛋白原重组表达及纯化方法，涉及融合蛋白表达纯化方法技术领域，提供一种基于中华乌塘鳢卵黄蛋白原基因，克隆其部分基因并体外重组质粒，转入大肠杆菌进行原核表达，IPTG诱导温度为16℃条件下获得高效融合表达，并且表达目的蛋白以可溶性状态存在，目的蛋白占细菌可溶性蛋白总量25％以上。应用纯化技术获得融合蛋白MNP‑VTG，通过蔗糖酶酶切将标签MNP从融合蛋白中分离获得目的蛋白VTG单体。该方法表达高效纯化VTG简便，因是可溶性，分离比包涵体简单，无需复性。获得的重组VTG为后续应用提供了稳定均一的原料基础。给重组蛋白可以用于生物活性功能研究，亦可以制备相应抗体开展检测研究。 | ||
| 搜索关键词： | 中华 乌塘鳢 卵黄蛋白 重组 表达 纯化 方法 | ||
【主权项】：
1.中华乌塘鳢卵黄蛋白原重组表达及纯化方法，其特征在于包括以下步骤：/n(1)根据中华乌塘鳢卵黄蛋白原全长基因(4738bp)的克隆部分片段(819bp)进行融合蛋白的原核表达，获得可溶性蛋白；/n(2)融合蛋白的纯化；/n(3)融合蛋白单体酶切分析；/n(4)分析纯化后融合蛋白浓度，采用蛋白浓度测定试剂盒测定重组蛋白浓度。/n
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