[发明专利]一种细胞组分自动提取方法

摘要

本发明属于本发明涉及生物技术领域，公开了一种细胞组分自动提取方法，包括如下步骤：（1）将细胞样本和致敏剂混合后加入加样槽孵育；（2）在孵育5‑10min后，移液器将样品加到滤管中；（3）喷气加压，细胞在剪切力和惯性冲击作用下破碎；（4）如需收集细胞总蛋白或某种亚细胞结构特殊分布的蛋白，可将步骤（3）所得产物先进行预处理再将系列细胞组分抽提液加入到过滤产物中进行抽提。该方法有别于传统方法中完全依靠裂解液的化学破碎，或者研磨匀浆法破碎，使细胞破碎更均一，效率高，蛋白破坏小。该方法即适用于样本数少的处理，也适用于样本总数量大的情况下的批处理，对单个样品量需求少，可有效节省人力，避免人力操作的差异性。

主权项

1.一种细胞组分自动提取方法，其特征在于，该方法所用仪器包括细胞组分自动提取装置，所用试剂包括致敏剂、系列细胞蛋白抽提液；/n所述细胞组分自动提取装置包括：移液系统、过滤系统、冷却系统、自动控制系统，所述冷却系统为移液系统和/或过滤系统提供0-4℃低温，其中，自动控制系统分别与移液系统、过滤系统、冷却系统连接；所述过滤系统包括：滤管放置盒（7）、通气供压系统（6）、滤管（9），其中滤管（9）包括滤柱（9-3）、收集管（9-1），滤柱（9-3）包括滤芯（9-2），滤芯（9-2）在压缩气体加压过滤过程中使细胞膜致敏的细胞破碎并将核酸DNA滤除，所得滤液即为不含DNA的其他细胞组分；所述移液系统包括：移液器吸头放置盒（1）、加样槽（8）、移液器（2）、吸头；所述移液器（2）为排式移液器，与加样槽平行排列，所述加样槽为成排连通的尖底圆孔组，其数量和位置与移液器吸头放置盒孔对应；所述通气供压系统（6）包括围栏（6-1）、压缩气瓶（6-4）、通气管道（6-5）、喷气嘴（6-7）；压缩气瓶通过通气管道与喷气嘴相接，压缩气瓶与通气管道之间设有总阀门（6-6），通气管道与喷气嘴之间通过螺纹连接，通气管道与喷气嘴之间设有分阀门（6-3），喷气嘴（6-7）与滤管接触处设有橡胶垫圈（6-2）；/n所述致敏剂包括聚乙二醇辛基苯基醚、乙基苯基聚乙二醇、缓冲盐溶液；/n所述系列细胞组分抽提液包括：聚乙二醇辛基苯基醚、乙基苯基聚乙二醇、聚氧乙烯山梨醇酐单月桂酸酯、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐，以及缓冲盐溶液；/n该方法包括如下步骤：/n（1）将吸头放入移液器吸头放置盒中，将预定数量的滤管放入滤管放置盒，最后将一定量的细胞样本和致敏剂混合后加入加样槽孵育；/n（2）启动自动提取程序，在孵育5-10min后，移液器移动到移液器吸头放置盒上方，下移插取吸头；移液器移动到加样槽上方，下移吸取样本混合液；移液器移动到滤管放置盒上方，下移将样品加到滤管中；移液器回移归位；/n（3）通气供压系统下移，喷气嘴插入滤管，滤管上沿与橡胶垫圈压紧密封，喷气嘴喷出加压气体，使致敏剂处理过的细胞悬液迅速通过滤芯，细胞在剪切力和惯性冲击作用下破碎，通气供压系统上移回原位；取出滤管，收集管内所得滤液即为不含DNA的其它细胞组分；/n（4）如需收集细胞总蛋白或某种亚细胞结构特殊分布的蛋白，可将步骤（3）所得产物离心处理，获得亚细胞结构沉淀，然后加入所述系列细胞组分抽提液，待不溶物全部溶解后所得产物即为某种亚细胞结构所含特定蛋白提取液。/n