[发明专利]单味中药治疗老年性瓣膜病药物筛选体系的构建方法在审
| 申请号： | 201911129686.3 | 申请日： | 2019-11-18 |
| 公开（公告）号： | CN112813100A | 公开（公告）日： | 2021-05-18 |
| 发明（设计）人： | 陈芳;司春婴;王丽;张炅;张艺嘉;崔小数;樊珂 | 申请（专利权）人： | 河南中医药大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10;C12Q1/02;G01N21/64 |
| 代理公司： | 郑州豫乾知识产权代理事务所(普通合伙) 41161 | 代理人： | 李保平 |
| 地址： | 450000 河南省郑*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明公开了单味中药治疗老年性瓣膜病药物筛选体系的构建方法，具体包括：对pmirGLO‑RAGE5’‑UTR及pmirGLO‑mut‑RAGE载体的构建；基因目的片段退火合成双链DNA，95℃热变性2min，每90s温度下降1℃，至25℃，放置30min，4℃存，‑20℃冻存备用；用Sac I和Xho I酶对pmir GLO载体进行双酶切，使之解链成线性化；双酶切产物经琼脂糖凝胶电泳进行DNA回收，再将线性载体和RAGE5’‑UTR载体相连接；同法连接突变型目的片段，构建突变型重组载体质粒；将两种重组载体质粒和空载体质粒分别转化大肠杆菌DH5ɑ，挑取菌落，进行质粒的抽提和鉴定；培养293T细胞，通过LipofectamineTM2000转入含有重组pmirGLO‑RAGE5’‑UTR或pmirGLO‑mut‑RAGE的质粒，转染24小时后，检测转染效率，选取稳定转染的细胞，即构建成功筛选系统。该筛选体系简单、有效，可更换靶位点推广应用。 | ||
| 搜索关键词： | 中药 治疗 老年性 瓣膜 药物 筛选 体系 构建 方法 | ||
【主权项】：
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