[发明专利]一种基于CRISPR/Cas9技术获得甘蓝型油菜黄籽种质的方法在审
| 申请号： | 201911139555.3 | 申请日： | 2019-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN110777164A | 公开（公告）日： | 2020-02-11 |
| 发明（设计）人： | 谢涛;王幼平;蒋金金;陈鑫;戎浩;郭图丽;蒋波 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C12N15/84 | 分类号： | C12N15/84;C12N15/113;C12N15/29;A01H5/10;A01H6/20 |
| 代理公司： | 32224 南京纵横知识产权代理有限公司 | 代理人： | 刘妍妍 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明属于基因工程技术领域，涉及一种基于CRISPR/Cas9技术获得甘蓝型油菜黄籽种质的方法，利用CRISPR/Cas9系统对甘蓝型油菜BnMYB123基因进行基因编辑从而获得BnMYB123基因功能缺失的黄籽甘蓝型油菜，BnMYB123在甘蓝型油菜中存在两个拷贝，其基因编码区序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，序列长度为786bp。BnMYB123能够调控异鼠李素及表儿茶素的合成和积累，从而调控甘蓝型油菜的种皮颜色。本发明为油菜黄籽种质的育种工作提供了一种全新的途径，为甘蓝型油菜黄籽种质的开发提供了理论依据。 | ||
| 搜索关键词： | 甘蓝型油菜 黄籽甘蓝型油菜 基因编码区序列 基因工程技术 合成和积累 表儿茶素 基因功能 技术获得 异鼠李素 种皮颜色 基因 调控 拷贝 油菜 育种 开发 | ||
【主权项】：
1.一种基于CRISPR/Cas9技术获得甘蓝型油菜黄籽种质的方法，其特征在于：利用CRISPR/Cas9技术对甘蓝型油菜BnMYB123基因进行定向编辑从而得到BnMYB123基因功能缺失的甘蓝型油菜，所述方法包括如下步骤：/n在甘蓝型油菜BnMYB123外显子区域选取以碱基NGG结尾的DNA片段作为靶位点，其中，N代表碱基A、G、C、T中的任意一种；/n利用所述靶位点，构建用于甘蓝型油菜BnMYB123基因定向编辑的CRISPR/Cas9重组载体；/n将重组载体通过电转化的方法转化根癌农杆菌GV3101中；/n用所述含有重组载体的根癌农杆菌GV3101转化甘蓝型油菜，获得转基因再生植株；/n对获得的转基因再生植株中BnMYB123基因包含所述靶位点的DNA区域进行扩增并测序；/n选择BnMYB123两个拷贝及两个等位基因都发生编辑的再生株系，进行表型观察，获得种皮颜色变黄的株系。/n
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