[发明专利]一种胚胎体外培养用高存活率的羊受精卵培养方法

摘要

本发明公开了一种胚胎体外培养用高存活率的羊受精卵培养方法，包括以下步骤：卵母细胞培养、精液处理、体外受精、受精卵子培养，所述受精卵子培养需放在培养箱中进行，所述培养箱包括箱体、箱体内放有多个培养皿、用于多个培养皿单独升降的升降装置、控制箱体内温度和CO2及O2的控制装置、培养皿拿取或存放过程中与箱体隔绝的隔绝机构。本发明提高受精卵成活率，通过培养箱的设置在不断查看受精卵过程中，能够保持培养箱内的营养环境。

主权项

1.一种胚胎体外培养用高存活率的羊受精卵培养方法，其特征在于：包括以下步骤：/na 、卵母细胞培养：将采集到的卵母细胞复合体移入成熟液滴中，每滴成熟液微滴中移入10-20枚卵母细胞，在38-39℃、5% CO2、饱和湿度环境下培养22-26h，卵母细胞复合体成熟为卵子；/nb 、精液处理：取新鲜或者解冻后的精液，稀释成精子稀释液，在每个受精液滴中移入精子稀释液，浆受精液滴连同培养皿或培养板一同放入CO2培养箱中平衡2-3h；/nc 、体外受精：将成熟液中的成熟卵子按每个受精液滴中30-50个成熟卵子的比例移入受精液滴中，然后放入在38-39℃、5% CO2、饱和湿度环境下培养箱中进行体外受精并培养18-24h；/nd 、受精卵子培养：精子与卵子受精培养18-24h后，去除受精卵子周围的颗粒细胞和附着的精子，以15-40枚/滴的密度放入胚胎发育液滴中，在饱和湿度的培养箱中进行体外培养6-8天；/n其中，所述步骤d中的培养箱包括箱体（1）、箱体内放有多个培养皿（2）、用于多个培养皿单独升降的升降装置、控制箱体内温度和CO2及O2的控制装置、培养皿拿取或存放过程中与箱体隔绝的隔绝机构，所述升降装置包括等距环形分布固定设于箱体上的多个空心管（30）、与多个空心管内腔连通设置的空心盘（31）、位于空心管内的活塞杆（32）、固定设于活塞杆上端用于放培养皿的固定座（33）、位于空心盘轴心处且插入空心盘内的进气管（34）、设于空心盘上的吸气管（35）、设于空心盘内用于密封空心管的密封件（36）、设于密封件上的空腔（37）、用于密封件上空腔与进气管连通的连接管（38）、固定设于进气管上的大齿轮（39）、与大齿轮齿合设置的小齿轮（300）、用于驱动小齿轮转动的第一电机（310）；吸气管把空心盘和空心管内的空气吸出，位于空心管内的活塞杆下降最底端，固定座上的培养皿位于培养箱体内，取其中某一个培养皿，第一电机驱动小齿轮转动，带动大齿轮转动，所述大齿轮固定设于进气管上，从而带动进气管转动，进气管与密封件通过连接管连接，从而带动密封件以进气管为轴心转动，密封件位移需要取的培养皿正下方，即空心管正下方，该空心管通过密封件上的空腔和连接管与进气管连通，进气管注入气体，带动活塞杆和固定座及培养皿整体上升，完成培养皿的单个拿取。/n