[发明专利]一株高效表达几丁质酶重组菌的构建及高酶活突变体的筛选有效
| 申请号： | 201911280564.4 | 申请日： | 2019-12-13 |
| 公开（公告）号： | CN112831510B | 公开（公告）日： | 2022-04-22 |
| 发明（设计）人： | 张大伟;王思佳;付刚 | 申请（专利权）人： | 中国科学院天津工业生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N15/56 | 分类号： | C12N15/56;C12N9/42;C12N15/75;C12N1/21;G01N21/31;C12R1/125 |
| 代理公司： | 天津市三利专利商标代理有限公司 12107 | 代理人： | 苏宇欢 |
| 地址： | 300308 天津市滨*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 一株高效表达几丁质酶重组菌的构建及高酶活突变体的筛选。本发明借助重组蛋白技术实现BcchiA1在枯草芽孢杆菌中的高效分泌型表达，解决了大部分微生物几丁质酶分泌量不足的问题。同时，创建一种新的几丁质酶高通量筛选方法，极大地提高了筛选通量和效率。此外，本发明涉及公开几株高酶活几丁质酶突变体，BcchiA1(Y10A)、BcchiA1(R301A)、BcchiA1(E327A)、BcchiA1(Y10A/R301A)、BcchiA1(Y10A/E327A)、BcchiA1(R301A/E327A)和BcchiA1(Y10A/R301A/E327A)，酶活性比野生型BcchiA1分别提高了2.49倍、0.67倍、3.61倍、2.39倍、3.46倍、4.75倍、16.89倍，其中BcchiA1(Y10A/R301A/E327A)酶活性最优。最终，将几丁质酶BcchiA1及其最优突变体BcchiA1(Y10A/R301A/E327A)与来源于Bacillus atrophaeus的单加氧酶BatLPMO10分别协同作用后，可使BcchiA1和BcchiA1(Y10A/R301A/E327A)的水解效率分别提高50.00％和46.71％。 | ||
| 搜索关键词： | 高效 表达 几丁质 重组 构建 高酶活 突变体 筛选 | ||
【主权项】：
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