[发明专利]一种pCUP1载体质粒的构建及其应用有效
| 申请号： | 202010128331.9 | 申请日： | 2020-02-28 |
| 公开（公告）号： | CN111378676B | 公开（公告）日： | 2021-08-20 |
| 发明（设计）人： | 马峰;华权高;廖怡辉;舒芹;张雪娇 | 申请（专利权）人： | 武汉华美生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12N15/81 |
| 代理公司： | 武汉蓝宝石专利代理事务所(特殊普通合伙) 42242 | 代理人： | 方菲 |
| 地址： | 430206 湖北省武汉市东湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供一种pCUP1载体质粒的构建方法和一种外源基因高拷贝稳定插入的重组毕赤酵母筛选方法；其中所述pCUP1载体质粒的构建方法包括以下步骤：采用PCR扩增体系对酿酒酵母中的CUP1基因进行扩增，得到PCR产物，采用电泳回收所述PCR产物，得到CUP1基因片段；采用BamH I限制性核酸内切酶对pPICZα A载体进行酶切，得到酶切产物，采用电泳回收所述酶切产物，得到酶切后的pPICZα A载体；将所述CUP1基因片段与所述酶切后的pPICZα A载体进行连接，得到所述pCUP1载体质粒。本发明采用上述pCUP1载体质粒的外源基因高拷贝稳定插入的重组毕赤酵母筛选方法，在不同浓度的铜离子诱导作用下，促使毕赤酵母自发形成高拷贝外源基因插入，以达到筛选周期短、效率高、成本低的外源基因高拷贝稳定插入的重组毕赤酵母筛选方法。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 pcup1 载体 质粒 构建 及其 应用 | ||
【主权项】：
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