[发明专利]一种光感细胞焦亡质粒的设计方法

摘要

本发明公开一种光感细胞焦亡质粒的设计方法。步骤包括：1)质粒构建基于pEGFP‑N1载体，使用标准的CMV启动子。拟南芥隐花色素2(Cry2)基因和隐花色素相互作用的Cib基因。在Cib1‑GSDMD插入一个等离子膜定位CAAX信号(‑K‑K‑K‑K‑K‑K‑S‑K‑K‑T‑K‑C‑V‑I‑M)，形成Cib1‑GSDMD‑CAAX结构。在Cry2的C端加入Caspase‑1，形成Cry2‑Caspase‑1结构，表达Cry2‑Caspase‑1蛋白。2)从正常组织或细胞中提取总RNA，并将其拟转录成cDNA，再以此为模板，设计针对GSDMD和Caspase‑1的引物来对其进行PCR扩增，随后分别连接至含有Cib和隐花色素2(Cry2)基因并分别带有GFP和mCherry荧光蛋白基因的真核表达载体中，转化大肠杆菌，然后挑取阳性克隆并进行基因测序，最后提取目的质粒。