[发明专利]一种增强CRISPR/Cas9系统基因编辑效率的方法

摘要

本发明涉及植物基因工程领域，尤指一种增强CRISPR/Cas9系统基因编辑效率的方法，本发明在PCR2后添加了一轮将U3和U6a的gRNA表达盒连接的PCR反应，然后再进行酶切连接，得到重组质粒；对U3表达盒与U6a表达盒连接，连接后的产物再与MH质粒连接，相对于现有技术同时将U3表达盒、U6a表达盒、MH质粒一起连接，本发明连接的难度远低于现有技术的连接难度，阳性克隆的比例大大增加，实现上述U3表达盒和U6a表达盒连接，重新设计了U3表达盒的下引物B2‑M和U6a表达盒的上引物B2’‑M，使B2‑M与B2’‑M的序列部分互补，这样可以使U3表达盒和U6a表达盒产物在第三轮PCR反应中通过粘性末端碱基互补连接起来。