[发明专利]一种体外大量获得白蜡虫dsRNA的体系构建方法在审

专利信息
申请号: 202010427109.9 申请日: 2020-05-19
公开(公告)号: CN111607589A 公开(公告)日: 2020-09-01
发明(设计)人: 陈航;凌晓霏;陆沁;张金稳;王伟伟;柳鹏飞;汪伟;陈晓鸣 申请(专利权)人: 中国林业科学研究院资源昆虫研究所
主分类号: C12N15/10 分类号: C12N15/10;C12N15/70;C12N15/113;A01N57/16;A01P7/04
代理公司: 昆明正原专利商标代理有限公司 53100 代理人: 于洪;陈左
地址: 650224*** 国省代码: 云南;53
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摘要: 发明涉及一种体外大量获得白蜡虫dsRNA的体系构建方法,首先提取白蜡虫总RNA并反转录为cDNA后进行PCR扩增,扩增产物与L4440载体质粒分别双酶切,将双酶切后产物连接,得到的重组质粒转化进入大肠杆菌感受态细胞HT115(DE3)菌株中,涂布固体培养基筛选单菌落,然后将单菌落液体摇床培养至OD600=0.38‑0.42,加入IPTG诱导后浓缩菌液,用于RNA干扰实验。本发明通过单细胞克隆大肠杆菌含有白蜡虫目标基因,又通过此大肠杆菌自身新陈代谢和大量的自我繁殖复制,获得大量含白蜡虫基因的dsRNA的菌液,将含dsRNA菌液喷施白蜡虫幼虫,从白蜡虫虫体表面进入体内,有效干扰目标基因表达量。
搜索关键词: 一种 体外 大量 获得 白蜡虫 dsrna 体系 构建 方法
【主权项】:
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